Pharmacométrie : expériences de compétition à l'équilibre

[el_kiwi]

Hello ! Je suis en train de réviser mon chapitre avant d'attaquer les qcm et je bute sur une partie de cours sur les expériences de compétition à l'équilibre. Dans mon cours il est écrit : 

•  Une quantité fixe de préparation

• -  Quantité fixe de ligand*(ref)

• -  Quantité croissante de ligand froid (test)

  On part de la référence 100 % : quantité de radioactivité qu’on mesure sur le récepteur tant qu’on n’a pas mis de ligand froid. On rajoute une concentration croissante de ligand froid que l’on teste: compétition entre le ligand chaud et la molécule testée. Déplacement du ligand chaud. Sur cette courbe on mesure l’IC50 (concentration inhibitrice 50) => concentration de ligand froid pour déplacer 50 % de ligand chaud.

 

J'ai mis en gras le moment où je capte pas. Du coup, est-ce que le ligand chaud ici, c'est considéré comme le ligand* (celui de référence), et la molécule testée c'est le ligand froid ? Et aussi, je comprends pas ce qu'il faut comprendre par le déplacement du ligand chaud, et la concentration de ligand froid pour déplacer 50% des ligand chaud (c'est quoi concrètement le déplacement, le déplacement de la courbe ? ou bien du ligand chaud au niveau de la cible ?) 

 

Voilà, ça fait pas mal de questions, j'espère que c'est compréhensible

[ElCassoulet]

@el_kiwi

Ton ligand chaud est radioactif, le but est de le visualiser au cours de l'expérience.

Quand tu rajoutes le ligand froid, qui est la molécule à tester, tu vas mettre en compétition les deux molécules pour la liaison au récepteur.

 

Le déplacement pourrait être appelé un échange si tu préfères, c'est l'échange du ligand chaud par le ligand froid sur les sites de liaison.

-> si la molécule d'intérêt à un IC50 faible, alors on pourra déduire de son affinité par rapport à la molécule de référence (= chaude ici). 

[el_kiwi]

merci beaucoup pour ta réponse @ElCassoulet, du coup si j'ai bien compris le ligand chaud va se fixer sur le site de liaison du ligand froid, et le ligand froid va se lier sur le site de liaison du ligand chaud ?

[ElCassoulet]

@el_kiwi

      Si tu cherches à comparer leur fixation et affinité pour une protéine, il vaut mieux qu'ils aient un site de fixation commun au moins en partie de sorte que la fixation de l'un empêche la fixation de l'autre, et inversement.

Ce que tu as dit me parait suffisamment juste pour que tu puisses le retenir

[maracétamol]

Coucou @el_kiwi

C'est une compétition à l'équilibre donc tu cherches à voir comment le ligand froid va remplacer le ligand chaud donc tout ça doit se faire sur une même cible pour que tu puisses bien le visualiser et faire la comparaison. Donc au final, oui le ligand froid se lie sur le site du ligand chaud car c'est le même site pour les deux 

 

[el_kiwi]

okay je capte maintenant merci @ElCassoulet et @maracétamol, enfaite dans ma dernière réponse y'a un peu de faux, car le ligand chaud ne se fixe pas sur le récepteur du ligand froid vu qu'il n'y a qu'1 seul récepteur commun aux deux ligands. Ce que je comprends in fine, c'est que le ligand chaud est initialement fixé sur le récepteur commun, et une fois que le ligand froid est ajouté de façon croissante, il va jarter le ligand chaud et se mettre sur le site de liaison à sa place, c'est bien ça ? y'a pas de site de liaison pour le ligand froid de base ? juste pour le chaud ?

[ElCassoulet]

@el_kiwi

On se rapproche petit à petit, c'est très bien !

La protéine qui sert de récepteur possède un site de fixation sur lequel peuvent se fixer à la fois le ligand chaud et ligand froid.

-> Quand la protéine est seule dans son milieu, le site de fixation est libre

-> Au début de l'expérience, on ne met que du ligand chaud, donc les sites ne peuvent être occupé que par ce dernier

-> On rajoute graduellement le ligand froid qui va petit à petit venir remplacer le ligand chaud 

 

il y a 33 minutes, el_kiwi a dit :

y'a pas de site de liaison pour le ligand froid de base ? juste pour le chaud ?

 le site de liaison est commun pour les deux ligands, si on avait mit le ligand froid au début c'est lui qui aurait occupé les récepteurs en premiers

Capiche ?

[el_kiwi]

Merci pour ta réponse @ElCassoulet ;)