PCR

[MonsieurCarcinome]

Bonjour, je voulais avoir concernant le qcm 11 de la colle de cette semaine, je voulais savoir au niveau de l’item C et D il est possible de ne rien obtenir si mutation de l’exon 5(le dernier) car il présente le codon stop ? Je veux etre sur que c’est bien sa ou pas ? Contrairement a l’exon 2 qui est au milieu.

 

mercii

[manganèse]

Bonjour @MonsieurCarcinome,

Selon moi l'absence totale de résultats suite à la mutation de l'exon 5 serait plutôt dû à une mutation dans la séquence reconnu par ton amorce.

Empêchant ainsi ton amorce de se fixer et donc le mécanisme complet de la PCR.

J'identifie quand même @Cassolnousmanque2 si elle à quelques précisions à rajouter. 

[PrisonMike]

Salut MonsieurCarcinome !

Attention la notion de codon stop fait référence à la traduction, rien à voir avec une PCR. Ici on se contente seulement de répliquer de l'ADN.

 

La séquence que l'on cherche à amplifier est comprise entre les 2 flèches orange (qui représentent les amorces sens et antisens).

Une mutation de l'exon 5 revient à changer la séquence de l'ADN matrice ciblée par l'amorce, la reconnaissance amorce/matrice sera peut-être perturbée voire impossible.

 

Tu as raison, une mutation de l'exon 2 n'impacte pas le fonctionnement de la PCR car cette séquence n'est pas ciblée par une amorce: il y aura une amplification.

 

J'ajoute que si tu mutes l'exon 5 et que l'amorce est incapable de s'hybrider, tu auras quand même une amplification grâce à l'amorce exon1. Donc on ne peut pas dire qu'on ne va "rien obtenir". Seulement comme la moitié de nos amorces sont inutilisables l'amplification va être considérablement ralentie, on perd complètement le caractère exponentiel de l'amplification PCR. Donc on aura une amplification minime (d'un seul des 2 brins) mais on ne détectera rien à l'électrophorèse car il y a un seuil quantitatif d'ADN minimum.

 

Hésites pas si c'est pas clair 

 

Tuteur Génome S1 2022-2023

 

[MonsieurCarcinome]

Super clear 

 

et un PASSmerci de plus

[Cassolnousmanque2]

Coucou ! 
je confirme ce qui a été dit au dessus ! 
 

en fonction des mutations l’amorce va pouvoir se fixer ou non 

dans le cas où elle ne se fixe pas, la PCR ne sera pas possible 

 

bon courage !