theclaverie Posted January 1, 2016 Posted January 1, 2016 Bonsoir, quelqu'un peut il m'expliquer ce qcm? Je ne comprend jamais comme procéder avec ce genre d'exercice.
Solution mariernl Posted January 3, 2016 Solution Posted January 3, 2016 Bonjour, Alors on raisonne à partir de GR intacts, en faisant agir dessus des glycosidases ou des protéases qui vont cliver uniquement en extracellulaire. Sachant que les protéines membranaires sont glycosylées uniquement en extra-cellulaire comme tu l'as vu en cours. Ensuite, on extrait les protéines des membranes et on repère soit la partie amino terminales (A) soit la partie Carboxy-terminale (B ). A) Vrai car lorsque tu fais agir une glycosidase elle passe de 90 kDa à 30 kDa B )Faux, car la séquence glucidique n'est pas codé par des AA. Si la partie N-ter est localisée en Xtra-cellulaire alors la partie N-ter en AA est bien clivée sous l'action d'une protéase et aucun AC dirigé contre l'extrémité N-ter ne peut la reconnaître. Donc C) Vrai D) Faux c'est de type 1 E) Faux d'après la composition d'une ancre GPI
Nanou Posted January 3, 2016 Posted January 3, 2016 Salut ! Je me permet juste de poser une question, je ne suis pas sure d'avoir compris... C'est parce qu'il n'y a rien au niveau de la piste 3 (figure A) que l'on peut dire qu'il y a eu action de la protéase ? Et donc que cette partie est en extra-cellulaire ? La bande en 3 de la figure B montre que la protéase n'a rien fait ? Je suis un peu perdue ^^
mariernl Posted January 3, 2016 Posted January 3, 2016 Non mais les western blot te montrent qu'il s'agit d'une protéine de type 1 avec l'extrémité NH2 en extra-cellulaire. Or la protase ne coupe QUE en extra-cellulaire puisqu'elle agit sur des GR INTACTS. Donc sur le WB A l'AC dirigé contre la partie NH2 de la protéine ne reconnaitra rien donc pas de bande car la partie Nter de la protéine a été clivé. Alors que pour le WB B l'AC dirigé contre le partie COOH qui était à l'intérieur de la cellule (donc pas clivé par la protéase) sera toujours reconnu. L'absence de protéine sur la piste 3 du WB A ne veut pas dire que la protéine n'a pas été clivée par la protéase, mais juste que l'AC utilisé pour révéler ce WB ne reconnait pas la protéine ! Tu comprends mieux?
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