Technique de binding

[maya-]

Bonjour, dans le cours de pharmacodynamique, je n'ai pas bien saisi le rôle du ligand froid (molécule qu'on teste si j'ai bien compris) dans la technique de binding. Serait-il possible de me réexpliquer ?

Merci d'avance :)

[Lulu_le_Fou]

salut maya l'abeille,

Il me semble que, 

Lors d'une expérience de saturation à l'équilibre, toi tu veux savoir ton Kd, en gros l'affinité de ton ligand sur son récepteur spécifique.

Sauf que si tu met seulement ton ligand chaud, radioactif (celui qui t'interresse), il va se fixer avec ses récepteurs spécifiques mais aussi à d'autres récepteurs non spécifiques ( en gros il s'accroche où il peut) === DONC tu as une courbe "faussée" puisque ta les liaisons avec récepteurs spécifiques et non spécifiques or ces derniers on s'en fout

 

Donc, tu vas mettre un ligand froid qui va fixer seulement sur les récepteurs spécifiques, donc ligand chaud ensuite se fixera seulement où il y a aura de la place c'est à dire les récepteurs non spécifiques. T'obtiens pour ton ligand chaud une droite passant par l'origine 

 

Dernière étape = tu veux ta courbe avec les liaisons des récepteurs spécifiques, donc tu fais Ltotale - Lnon spécifiques (résultats des deux expérience ci dessus) = Liaison spécifique 

 

Donc sans ligand froid, ça devient compliqué de faire ce genre de courbe pour savoir affinité ligand-récepteur

 

Je laisse les tuteurs médoc d'éclairer encore plus s'il y'a besoin ! @cellulesouches

Edited October 6, 2022 by Lulu_le_fou

[maya-]

merci @Lulu_le_fou d'avoir pris le temps de me répondre ! Mais ma question portait plus sur la partie du cours avant celle sur la saturation à l'équilibre. La première partie évoque les 3 phases de la technique de binding : Dans le tube on met du L et du L* mais lors de la dernière étape de la séparation où l'on compte la fraction libre et la fraction liée nous n'évoquons plus les ligands froids. Je me questionnais donc sur leur rôle.

Ce n'est pas très claire dans ma tête donc peut-être que la première partie n'est qu'une "introduction" à la suite du cours que tu m'as expliqué, je ne sais pas...

[cellulesouches]

Coucou!

Alors @Lulu_le_fou t'as bien expliqué le fonctionnement de la saturation à l'équilibre. Cependant, je ne comprends pas trop ta question?
On est d'accord que le ligand froid, il est la pour pouvoir se fixer aux récepteurs spécifiques pour permettre ensuite au ligand qui nous intéresse (=ligand radioactif) de se fixer sur les récepteurs soit qui reste soit autre part sur la membrane.
Le ligand froid sert simplement à se fixer de manière spécifique sur tes récepteurs et à les saturer, ce qui permet ensuite de voir où ton L* va se fixer et c'est LA que se déroule l'experience de saturation à l'équilibre, on est la pour voir comment vont se saturer les récepteurs mais L froid sert simplement à saturer tes récepteurs pour observer ce que le L* fait par la suite. (il se fixera où il pourra).
Pour ce qui est des expériences de compétition à l'équilibre, cette fois ci ton L froid sera une molécule "test" pour permettre de visualiser s'il y a une compétition entre 2 types de molécules par exemple.
Je sais pas si c'était vraiment ça ta question à vrai dire moi même j'ai pas trop compris ce sur quoi tu posais la question mais j'ai essayé de te montrer un peu le rôle du L froid