Pupan 2018

[yeisir]

Salut!

Alors j'arrive pas à comprendre la figure : https://ibb.co/kBvYxqR

Mercii

D'ailleurs dans la correction ils disent que jac peut se lier quand on a pas de conditions dénaturantes et l'AC peut se lier quand on est en WB, mais je comprends pas d'ou ils sortent ces infos

[Pitchounou]

Hello @yeisir! 

 

Cette expérience est ce qu'on appelle un pull-down. On couple une molécule d'interêt à des billes, on l'incube avec diverses autres protéines et ensuite on récupère les billes, on sépare le tout et on regarde ce qu'on a récupéré. C'est une technique qui te permet d'identifier des partenaires protéiques, des protéines qui interagissent ensemble. 

 

• Commençons par nous débarrasser de la ligne la moins intéressante, celle billes d'agarose Jac(-) qui est la plus à droite, qui est vide, et qui donc nous permet de nous assurer que les molécules en question n'interagissent pas avec la bille (ce qui fausserait l'expérience). Si on ne l'avait pas fait on ne pourrait pas affirmer que rDsg1 interagit avec Jac, elle pourrait interagir avec la bille. 

 

• La colonne la plus interessante est la plus à gauche. Pour la figure A, on a donc incubé billes + Jac avec la rDsg1. On observe bien une bande de 50 kDA qui correspond à la protéine rDsg1 ce qui signifie que rDGS1 interagit avec Jac. Très simplement quand on a incubé billes + bac et Dsg1, Dsg1 s'est accrochée et donc qu'on a récupéré les billes et qu'on a séparé le tout on a récupéré DGS1. Même chose pour la figure B, on obtient une bande dans l'épiderme humain ce qui signifie que Jac interagit avec une protéine de 150 kDA de l'épiderme humain (à voir le reste de l'énoncé pour dire ce que c'est). 

Le 18/03/2022 à 14:49, yeisir a dit :

D'ailleurs dans la correction ils disent que jac peut se lier quand on a pas de conditions dénaturantes et l'AC peut se lier quand on est en WB, mais je comprends pas d'ou ils sortent ces infos

Je suis pas sur de comprendre ta question. Ils t'expliquent l'AC reconnaît rDsg1 en conditions dénaturantes (puisque SDS-Page) et que justement on a aucun moyen de savoir si on pourrait utiliser cet anticorps pour co-immunoprécipiter en conditions non dénaturantes (puisqu'on ne connait pas la localisation de l'épitope que reconnaît l'anticorps, peut être qu'il se fixe à un épitope normalement caché et découvert par la dénaturation). 

 

N'hésite pas si jamais c'est pas clair ! 

Edited March 19, 2022 by Pitchounou