diana Posted March 8, 2022 Posted March 8, 2022 Salut ! Je comprends pas bien les items a, c et d du QCM 3 du sujet 1 de pharma ... La a et c je comprends pas le principe et pour la d qui est compté vrai je comprends pas comment Eco R1 pourrait donner deux fragments alors qu'il est présent 1 fois Si quelqu'un pourrait m'éclairer ça serait sympa ;) Quote
Solution julierx Posted March 8, 2022 Solution Posted March 8, 2022 Coucou @diana Pour la A et la C, on cherche à savoir si le fragment est inséré dans le bon sens ! Comme il s'agit d'un clonage non orienté, l'insert peut s'insérer dans un sens comme dans un autre mais il n'y en a qu'un seul des 2 qui permettra d'avoir la protéine fonctionnelle. Pour savoir on va donc utiliser des enzymes de restrictions et selon les fragments que l'on obtient on peut en déduire le sens d'insertion. Avec Bam H1 ce n'est pas possible parce que dans un sens comme dans l'autre on obtiendra un fragment de 740 pb et un autre de 3800 pb. Avec EcoR1 c'est possible !! Dans le bon sens on obtient un fragment de 770 pb et un autre de 3770 alors que dans le mauvais sens on obtient un fragment de 1370 pb et un autre de 3170 pb. Pour la D, non EcoR1 est bien présent 2 fois : sur le plasmide pRH et sur l'ADNc que l'on insert au plasmide précédent Quote
matoche Posted March 8, 2022 Posted March 8, 2022 Salut! pour l’item A: c’est faux car si tu coupes avec bamh1, ton fragment pourra s’insérer dans un sens ou dans l’autre, mais la taille des fragments sera la même. Admettons que le premier site bamh1 est appelée extrémité a et l’autre b. Tu ouvres l’autre vecteur en coupant au site bamh1. Tu insères ab mais il peut se mettre soit dans le sens ab soit dans le sens ba mais comme on a que des sites bamh1, tu ne peux pas savoir si il est dans le bon sens, car les fragments feront la même taille peu importe l’orientation (ab = ba). item c: ton fragment ab (donc bien orienté) contient un site ecoR1 à 70pb (930-860). Le vecteur dans lequel tu insères ab contient un site ecoR1 a 800 pb. quand tu vas digérer avec ecoR1, tu n’obtiendras pas des fragments de même taille selon l’orientation ab ou ba. Si c’est ab (bon sens) tu vas obtenir un fragment de 770 pb (1500-800+70 car tu as ouvert à bamh1) si il n’est pas dans le bon sens (ba) tu obtiendras un fragment de 1370 pb (700 + 670) (670 correspond à l’autre partie de ab entre ecoR1 et b). En fonction des fragments que tu obtiens, tu pourras determiner le sens d’insertion. item d: si il est bien inséré, tu auras un fragment de 770 pb et un de 3370. Quote
diana Posted March 8, 2022 Author Posted March 8, 2022 merci @julierx et @matoche pour toutes les précisions !! Mais j'en profite pour te demander pourquoi @matoche on fait pas plutot 3800-870 au lieu de faire 1500-870 puisque le plasmide fait 3800 ? Quote
matoche Posted March 8, 2022 Posted March 8, 2022 je cherche à avoir la longueur du fragment entre ecoR1 (qui permettra de savoir si on est dans le bon sens) et bamh1 (site d’insertion). Je fais donc 1500-800. Ensuite tu rajoutes 70 pour atteindre le site ecoR1 de l’insert. 3800 c’est bien la longueur totale mais elle te permettra à calculer le deuxième fragment obtenu en digérant les sites ecor 1 Quote
diana Posted March 9, 2022 Author Posted March 9, 2022 ah d'accord c'est bon tout est clair merci beaucoup !! @matoche Quote
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