immuno analyse

[purproduitdusud]

j'ai pas très bien compris la dernière diapo d'immuno analyse , avec les INFgama  les les CD4 et les CD8 , je comprend pas le mécanisme , et ce qu'on cherche a mettre en évidence , merciii 

[Ohana]

Coucou! 

Alors si tu parles de cette diapo (en pièce jointe), je vais essayer de t'expliquer tout ça.

 

Tout d'abord, on cherche à quantifier ou à marquer nos Ag membranaire (soit CD4 et CD8) et nos Ag intracellulaires (cytokine  = IFNgamma).

 

Pour la technique : 

On va effectuer une stimulation polyclonale pendant 4h avec du PMA (analogue du Diacylglycérol) qui permet d'activer les PKC/ionomycine + du bréfeldine A (inhibe la sécrétion vésiculaire pour éviter la sécrétion de cytokines en Extracellulaire).

Ensuite on va marquer les Ag de surface avec un anti-CD4 et anti-CD8.

On va faire une fixation/ perméabilisation artificielle + des Ac anti-IFNg (avec exemple FITC). 

Puis on effectue une cytométrie en flux 

=> Au final, tu pourras quantifier tes Ag marqués. Soit ici, nous avons représentés les LTCD8+ et IFNγ+, et LTCD8+ et IFNγ-. 

Tu peux faire le même raisonnement avec tes CD4+.

 

Ici sur le diapo, on voit que nous sommes toujours au dessus du seuil de positivité pour les LTCD8 (ligne horizontale du graphique du Haut). Et tu as 73% de LTCD8+ et IFNγ+.

Sur le schéma du dessous tu te retrouves avec 12% de LTCD4+ et IFNγ+. 

 

Enfaite cela te montres surtout comment tu dois lire et interpréter une cytométrie en flux en fonction des lignes de positivités (Lignes de CD8 à la verticale et ligne de IFNγ à l'horizontale). 

 

Je ne sais pas si c'est très clair, si jamais tu as d'autres questions tu n'hésites pas.

[Analyse]

Salut !

 

De ce que je comprends on cherche à mettre en évidence les les CD4 ou les CD8 activés.

 

D'abord, on fait une stimulation pour que les lymphocytes se multiplient.

Pour déterminer si c'est un CD4 ou un CD8: on utilise des Ac anti CD4 ou des Ac anti CD8. Puisque les Ag sont sur la membrane plasmique, à l'extérieur de la cellule on peut directement utiliser les Ac.

Si un CD4 ou un CD8 est activé, il y a de l'IFNgamma dans son cytoplasme. Donc pour savoir s'ils sont activés on cherche l'IFNgamma mais l'IFNgamma est dans la cellule donc avant de mettre un Ac dirigé contre lui on perméabilité la cellule sinon l'Ac ne peut pas rentrer dans la cellule et le marquer.

 

Puis on fait une cytométrie en flux : on couple chaque Ac avec une couleur différente et en fonction de la couleur on détermine si c'est un CD4 ou un CD8 et s'il est activé ou non. 

 

J'espère que ça t'as aidé si c'est pas clair je pourrais te ré expliquer 

 

Bon courage !!!

 

désolée j arrive un peu tard mais mon message ne s'est pas envoyé tout à l'heure sinon je suis tout à fait d'accord avec Ohana