Calimera Posted February 5, 2022 Posted February 5, 2022 Bonsoiiiir, Est-ce que quelqu'un peut m'expliquer à quoi sert la cytométrie en flux ? (je demande car il ne me semble pas qu'elle ait été approfondi dans le cours mais je l'ai retrouvé dans la session 2) Merciiii Quote
Solution PASSlesrep Posted February 5, 2022 Solution Posted February 5, 2022 Cytométrie en flux Cela sert à déterminer si la protéine est présente ou non. C’est une analyse cellule par cellule de la fluorescence d’une population cellulaire choisie grâce a un laser - Cellules marquées par des Anticorps fluorescents - Cellules exprimant protéines fluorescentes (étiquette GFP) - (+ marquages spécifiques : détermination phase du cycle cellulaire, mort cellulaire qui n’est pas appliqué aux protéines) On peut dire pour chaque cellule si elle est marquée ou non. La sonde constante sert à voir qu’on obtient toujours la même quantité d’une protéine constitutive, et permet alors de voir si on a réalisé l’expérience de la bonne manière. c'est tiré d'un cours de paces. chloooooomll and Calimera 2 Quote
Calimera Posted February 5, 2022 Author Posted February 5, 2022 Merci beaucoup @PASSlesrep!! PASSlesrep 1 Quote
Pitchounou Posted February 6, 2022 Posted February 6, 2022 Salut @Calimera ! @PASSlesrep a tout à fait raison. Je rajoute juste un petit truc : la cytométrie en flux ne sert pas uniquement à déterminer si une protéine est présente ou non. Elle permet d'aller encore plus loin et de compter et de caractériser les cellules. En effet le laser permet de les caractériser selon la taille ou la granulité qui sont détectés en fonction de la diffusion de la lumière, et également et c'est ce que disait @PASSlesrep de compter et de caractériser selon des anticorps marqués par des fluorochromes. A noter que les antigènes détectés ne sont pas forcément extra-cellulaire mais peuvent être intra-cellulaires, il suffira de faire une perméabilisation ! Ce qui est génial c'est que tu peux séparer et compter plein de populations dans un mélange très hétérogène. Par exemple si tu as un mélange avec des lymphocytes, des neutrophiles, des monocytes tu peux commencer par séparer les lymphocytes des autres parce qu'ils sont plus petits et moins granuleux. Ca donne ça : Puis pour séparer tes lymphocytes tu utilises des anti-CD3 et des anti CD4. Les anti-CD3 permettent de reconnaitre les lymphocytes T. Les anti-CD4 permettent de reconnaître les lymphocytes TCD4. Ceux qui sont CD3 - et CD4- ne sont pas des lymphocytes T, donc ce sont des lymphocytes B ou NK. Ceux qui sont CD3+ CD4 + sont des LTCD4 et ceux qui sont CD3+ CD4- sont des LTCD8 (ici ils ne se sont même pas embêtés à faire un anti-CD8 ils ont fait par élimination). , Voilà c'était juste pour donner un truc un peu concret :)) Bon courage pour la suite ! IceTea, Calimera, chloooooomll and 2 others 1 1 3 Quote
Calimera Posted February 6, 2022 Author Posted February 6, 2022 Un grand merci @Pitchounou, les schémas m'ont aidé à comprendre! Pitchounou 1 Quote
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