QCM plasmides

[Agalactose]

Bonjour !

 

Je cherche des explications au sujet des items suivants :

 

- QCM 12 (pj) : "En utilisant un vecteur viral intégratif, les chercheurs devraient obtenir le même
résultat sur un Western Blot réalisé 2 mois post modification génique". (V) 

-> ici, je ne comprends pas le résonnement, ni le terme "d'intégratif" (par rapport au vecteur viral usuel). 

 

- QCM 13 : énoncé : Des chercheurs ont modifié génétiquement des cellules humaines
d’adénocarcinome ovarien par un vecteur viral (AdRhoB). Ce vecteur code à la fois la
protéine RhoB et la protéine fluorescente GFP.
C. La construction génique qui a permis de réaliser le vecteur viral comprend au
minimum 2 cadres de lectures ouverts eucaryotes. (V) 

-> je ne comprends pas non plus la démarche, comment déterminer le nbr de cadres de lecture ouverts ?

 

- QCM 15 (2 pj) - BC : Je ne suis pas sûre de bien comprendre tous les items (je n'ai pas leur correction détaillée), il me faudrait de l'aide sur le QCM entier svp.

 

Un grand merci à celui ou celle qui m'éclairera !

 

[Ohana]

Coucou,

Alors je vais essayer de t'éclairer du mieux que je peux ihi.

 

Pour le QCM 12: un vecteur intégratif c'est un vecteur qui insère son patrimoine génétique dans le génome de l'hôte. 

Donc là sur le le QCM tu as le WB 48h après la transfection. Or comme on utilise un vecteur viral intégratif, ton WB sera le même 2 mois après.

 

Pour le QCM 13: Je pars du principe que tu as un vecteur viral qui code à la fois la protéine RhoB et la protéine fluorescente GFP. Donc ici tu as 2 protéines dans un même vecteur donc 2 cadre de lecture minimum ouvert. De plus comme on modifie des cellules humaines, on se retrouve avec 2 cadres de lectures ouverts EUCARYOTES.

 

Pour le QCM 15: 

-Item A: Pour qu'il y ai transcription, le promoteur doit être dans le bon sens par rapport au gènes à transcrire. Sinon il ne peux pas réaliser correctement sa fonction de promoteur. 

-Item B: Le site de coupure de l'enzyme Not se trouve dans le pCov seulement (et une seule fois). Donc après son utilisation on aura une seule bande de 5500 pb avant la transformation et une bande de 5500pb + pb de la séquence du plasmide intégrés (aprés transformation). A partir de la tu peux en déduire par soustraction de tes 2 résultats la taille du plasmide. 

-item C : Dans le plasmide pPROM, le promoteur procaryotes se trouve entre 2 sites pour les enzymes HindIII donc cette enzyme permet d'identifier le plasmide contenant le promoteur procaryote. 

-Item D : Quand tu utilise une seule enzyme tu aura une insertion non orienté de ton plasmide, donc tu ne pourras pas choisir le sens d'insertion. 

-Item E :  Pst1 coupe au milieu du promoteur procaroyte dans pPROM, de plus on ne retrouve pas de site de coupure dans le vecteur pCov (donc transformation impossible avec ce vecteur). De plus d'aprés le raisonnement de l'item précédent, l'item E devient doublement faux. 

 

J'espère t'avoir aidé un max. N'hésite pas si tu as d'autres questions! 

Pleins de bisouuuuuus 

[Agalactose]

Coucou ! 

 

Tout d'abord, merci beaucoup pour tes explications ultra claires ! Je pense avoir bien tout assimilé mais il me reste encore une interrogation que voici :

 

J'ai bien compris l'histoire de vecteur intégratif mais je n'arrive pas à voir la différence avec les classiques (qd on ne précise pas qu'ils sont intégratifs), j'ai l'impression qu'ils sont tous intégratifs car ils insèrent tous leur patrimoine génétique dans leur hôte non !??

[manganésium]

4 hours ago, Agalactose said:

Coucou ! 

 

Tout d'abord, merci beaucoup pour tes explications ultra claires ! Je pense avoir bien tout assimilé mais il me reste encore une interrogation que voici :

 

J'ai bien compris l'histoire de vecteur intégratif mais je n'arrive pas à voir la différence avec les classiques (qd on ne précise pas qu'ils sont intégratifs), j'ai l'impression qu'ils sont tous intégratifs car ils insèrent tous leur patrimoine génétique dans leur hôte non !??

certaines vont directement etre transcrites et traduites en protéines sans jamais intégrer le génome de la cellule hote il me semble !

[Agalactose]

@manaloux D'accord merci beaucoup à vous deux !