Pull down / Immunoprecipitation

[tutoweb]

Bonjour ! Je n'ai pas trop saisi la difference entre ces 2 méthodes. À ce que j'ai compris, 

Immunoprecipitation : billes capte les anticorps des proteines et donc les proteines viennent 

Pull down : billes capte proteines et donc les partenaires viennent 

 

C'est ça haha ? Merci :)

[Pitchounou]

Salut @chlorure! 

 

Le pulldown et l'immunoprécipitation sont très similaires c'est vrai ! La seule différence c'est ce qu'on utilise pour "capturer" la protéine.

 

• Dans le pulldown, on a un extrait avec des protéines. Dans cet extrait on met des billes qu'on a couplé avec un appât. Ces Billes-apâts se fixent sur les protéines et après on peut les isoler 
• Dans l'immunoprécipitation c'est le même principe mais avec des anticorps. On met dans notre extrait des anticorps anti-protéine qu'on cherche à analyser, puis on rajoute des billes anti-anticorps. 

 

Dans les deux cas après on analyse les protéines présentes sur les billes, avec un Western Blot par exemple 

En résumé dans le pulldown la protéine qu'on cherche à analyser interagit avec l'appât fixé sur une bille et dans l'immunoprécipitation la protéine interagit avec des anticorps, qui se fixent secondairement à des billes.

 

C'est bon pour toi ? 

 

NB : c'est très important de s'entraîner pour ce genre de chose, l'immunoprécipitation et notamment la coimmunoprécipitation ça tombe souvent ! Le principe c'est souvent de voir si 2 protéines interagissent ensemble. En fait on immunoprécipite la protéine 1, et lorsqu'on fait le western blot non seulement on met des anticorps anti protéine 1 pour l'identifier mais également anti-protéine 2. Ainsi si la protéine 2 interagit avec la protéine 1, on l'aura immunoprécipité avec, et donc on aura une bande au WB. 

 

Edited January 20, 2022 by Pitchounou

[Maverick06]

Hello !!

 

La technique d'immunoprécipitation consiste à  la précipitation d'un antigène (protéine) en solution par un anticorps qui agglutine spécifiquement une protéine particulière. On l'utilise pour isoler et concentrer une protéine précise parmi des milliers d'autres. L'immunoprécipitation impose que l'anticorps soit lié à un substrat solide à certaines étapes du traitement.

 

Après je ne connais pas pull down, on ne l'avait pas à l'époque

 

J'ai aidé en partie :) 

[tutoweb]

merci beaucoup ! @Pitchounou, connais-tu un sujet de QCM où il y a ce probleme que tu viens de decrire s'il te plait? :)

[Pitchounou]

@chlorureYes absolument, regarde dans les annales de Maraichers la partie "initiation à la recherche". Tu as déjà par exemple un QCM, le QCM 5 de l'épreuve 2019-2020 qui est assez typique :)