Plasmide calcul du nombre de pb

[mouchou]

Salut

j'ai un peu de mal à resoudu l'item D.

comment faire le calcul?

Aussi comment savoir à quel endroit on doit couper le plasmide?

personellement je pense que A est juste car je me suis basé sur la cassette mais je doute que ça soit la bonne methode.

Merci beaucoup !!

[Lulu17]

Coucouu, 

Pour savoir quelles enzymes utiliser, il faut que tu regardes la séquence codante pour P53. Tu vois que sur la séquence il y HindIII (présente 2 fois), BamH1 et Xho1.

 

Mais pour que P53 soit activée il faut couper de manière à garder GFP donc tu dois choisir BamH1 (qui est placé avant GFP) et Xho1 (donc oui l'item A est vrai).

BamH1 et Xho1 sont aussi sur le plasmide juste après le 1er promoteur eucaryote : c'est ici que ça couper le plasmide.

 

Pour le calcul du nombre de pdb :

- les enzymes enlèvent 50pdb du plasmide car BamH1 est situé à 1350pdb et Xho1 est situé à 1400pdb donc 1400-1350 = 50pdb

- il reste 6200-50 = 6150pdb sur le plasmide

- sauf que tu vas ajouter la séquence qui fait (1300-670) 630pdb 

- donc au total le plasmide recombinant aura 6150 + 630 = 6780 pdb 

 

Voilaa, j'espère que ça t'auras aidé !

[Moustache]

Coucou @romanov

Alors déjà on te dit dans l'énoncé qu'on veut insérer dans le plasmide la séquence qui code pour P53 et la GFP donc tu sais que tu ne pourras pas couper ton insert avec HindIII sinon tu "sépares" la GFP de la P53. Il te reste comme choix BamH1 et Xho1. Donc tu coupes ton insert avec ces deux enzymes, maintenant pour déterminer la taille de ton insert c'est très simple tu calcules le nombre de pb entre BamH1et Xho1: 1300-670= 630pb. Donc taille de ton insert: 630pb

Tu coupes ton plasmide squee avec les mêmes enzymes de restriction BamH1 et Xho1. Cette petite partie fait 50pb, pour le trouver tu refais ton petit calcul (nombre de pb entre BamH1 et Xho1): 1400-1350=50pb. Donc ton plasmide aura une taille après digestion par les enzymes de 6150pb. Pour le trouver tu enlèves juste la partie qui fait 50pb. Maintenant tu assembles le tout donc insert+plasmide: 6150+630=6780pb 

C'est plus clair? 

(@Lulu17 a été plus rapide)