Plasmide M2018

[Claramnioblaste]

Bonsoir :)) Quelqu'un pourrait m'expliquer comment résoudre le qcm 2 ? Même avec la correction je n'ai pas bien compris la méthode

Je n'ai pas vu le sujet sur le forum mais je n'ai peut être pas cherché au bon endroit (désolée si la question a déjà été posé  )

 

énoncé page 37/38 : https://tutoweb.org/PDFs/Librairie/Archive PACES/Maraîchers/Annales concours/2017-2018/S2 - Concours Maraîchers Mai 2018.pdf

 

Correction page 20 : https://tutoweb.org/PDFs/Librairie/Archive PACES/Maraîchers/Annales concours/Corrections Détaillées/S2/S2 - Corrections Détaillées Concours Maraîchers Mai 2018.pdf

 

 

[Dr_Zaius]

Coucou @Claramnioblaste!

A) C'est vrai dans le plasmide de la figure 1 tu vois que BamH1 est en amont de la l'ADN codant la beta-globine et en aval de la séquence donc il pourra permettre d'identifier si l'insert est bien intégré au plasmide n°2 de la figure 2 qui comporte une séquence BamH1. Cette hypothèse est confirmée par la figure 3 qui montre des bandes pour les 4 clones digérés par BamH1 à 4500 pb, sachant que la séquence de la beta-globine fait 1000 pb puisque comprise dans le plasmide de la figure 1 entre 3600 et 4600 pb on voit des bandes à 1000 pb pour les clones 1,2 et 4 montrant que ces derniers l'ont intégré

 

B) C'est faux car EcoR1 dans la figure 1 coupe au milieu de l'ADNc codant la beta-globine donc ça nous aide pas à savoir si il est dans le bon sens ou pas contrairement à une enzyme de restriction qui serait au début ou à la fin de la séquence d'intérêt

 

C) C'est faux (oui je sais je pense qu'il y a erreur dans la correction ) déjà la digestion par BamH1 comme indiquée dans le A) nous montre que la séquence de la beta-globine  est bien intégrée et ensuite il faut vérifier qu'elle est intégrée dans le bon sens pour cela on va regarder avec Hind3 -> si c'est dans le bon sens on devrait avoir une bande sur la figure 3 de 210 pb. Pourquoi 210 pb ? Car tout simplement entre BamH1 et Hind3 dans la figure 1 on a 200 pb et que dans la figure 2 on a 10 pb ducoup la somme fait bien 210 pb. On devrait donc sur la figure 3 retrouver une bande à 210 pb signe de l'intégration dans le bon sens de la beta-globine or ce n'est pas le cas.

 

D) C'est vrai la figure 3 nous donne tout les éléments non seulement la séquence est intégrée car après digestion par BamH1 on a un fragment de 1000 et un de 4500 pb mais de surcroit on a une bande après digestion par Hind3 de 210 pb ce qui montre que la séquence est intégrée dans le bon sens donc on a toutes les conditions réunies pour dire que le clone 2 synthétise bien la beta-globine.

 

E) Sans doute hors programme la réponse donnée est : Faux : La protéine synthétisée est cytosolique ; elle n’est donc pas retrouvée dans le surnageant

sauf qu'on a jamais parlé de surnageant bref

 

en espérant que tout cela t'a aidé !

[Claramnioblaste]

@Dr_Zaius WOW.  t'as été top ! j'attends la confirmation d'un tuteur et je valide ta réponse t'es le boss franchement ^^

juste pourquoi vérifier le sens avec HindIII ? et pas avec un autre 

Edited January 15, 2022 by Claramnioblaste

[Dr_Zaius]

18 minutes ago, Claramnioblaste said:

juste pourquoi vérifier le sens avec HindIII ? et pas avec un autre 

car c'est une séquence unique contrairement à BamH1 et de surcroit elle n'est pas en plein milieu du gène codant la beta-globine donc elle peut servir par calcul du nombre de bases après action des enzymes de restriction à savoir si on est dans le bon sens ou pas. Voilà tout

[choLOLApine]

helloooo!

 

Il y a 2 heures, Dr_Zaius a dit :

C) C'est faux (oui je sais je pense qu'il y a erreur dans la correction ) déjà la digestion par BamH1 comme indiquée dans le A) nous montre que la séquence de la beta-globine  est bien intégrée et ensuite il faut vérifier qu'elle est intégrée dans le bon sens pour cela on va regarder avec Hind3 -> si c'est dans le bon sens on devrait avoir une bande sur la figure 3 de 210 pb. Pourquoi 210 pb ? Car tout simplement entre BamH1 et Hind3 dans la figure 1 on a 200 pb et que dans la figure 2 on a 10 pb ducoup la somme fait bien 210 pb. On devrait donc sur la figure 3 retrouver une bande à 210 pb signe de l'intégration dans le bon sens de la beta-globine or ce n'est pas le cas.

alors attention juste pour cette partie c'est un piège suuuuper fréquent, ne confondez pas transcription et traduction les loulous sinon il va vous arriver des bricoles...(faut pas crier trop vite aux erratas)

ton raisonnement serait juste si on parlait de TRADUCTION, puisqu'effectivement pour que la protéine soit traduite il faut que l'ADNc soit dans le bon sens, sinon elle ne s'exprimera pas

ici on parle de TRANSCRIPTION, or étant donné qu'on insert uniquement l'ADNc et pas l'ensemble promoteur + ADNc + terminateur, peu importe le sens de l'insert, l'ADNc suit le promoteur dans le plasmide receveur donc il sera transcrit

 

Il y a 2 heures, Dr_Zaius a dit :

E) Sans doute hors programme la réponse donnée est : Faux : La protéine synthétisée est cytosolique ; elle n’est donc pas retrouvée dans le surnageant

pour répondre à cette question, il faut savoir ce qu'est le surnageant effectivement (don't worry vous en parlerez en immunoanalyse), en gros c'est le milieu extracellulaire que l'on récupère lors d'une culture, donc pour qu'une protéine soit retrouvée dans le surnageant il faut qu'elle soit excrétée, or pour qu'une protéine soit excrétée elle a besoin d'une séquence protéique de sécrétion qui précède l'ADNc, ici pas de séquence de sécrétion donc la protéine reste cytosolique et ne sera pas retrouvée dans le surnageant de culture!

 

pour les autres questions, je valide les réponses de @Dr_Zaius

bonne soirée à vous! 

[Claramnioblaste]

@choLOLApine @Dr_Zaius merci beaucoup à vous 2 vous êtes au top ça commence a être + clair.  (donc au final pas besoin de faire tout le tableau qui est donné dans la correction ? parce que c'est super long à faire...)

 

[choLOLApine]

Le 16/01/2022 à 09:25, Claramnioblaste a dit :

merci beaucoup à vous 2 vous êtes au top ça commence a être + clair.  (donc au final pas besoin de faire tout le tableau qui est donné dans la correction ? parce que c'est super long à faire...)

personnellement je le faisais toujours pour être sûre de pas me tromper parce qu'on peut très très vite s'emmeler les pinceaux, honnêtement avec l'habitude ça se fait très rapidement et je trouve que ça fait gagner du temps mais à toi de voir! 

[Claramnioblaste]

Il y a 7 heures, choLOLApine a dit :

personnellement je le faisais toujours pour être sûre de pas me tromper parce qu'on peut très très vite s'emmeler les pinceaux, honnêtement avec l'habitude ça se fait très rapidement et je trouve que ça fait gagner du temps mais à toi de voir! 

je vais peut être venir à la permanance ça sera plus facile pour comprendre cette technique ahah

Edited January 17, 2022 by Claramnioblaste

[choLOLApine]

Il y a 17 heures, Claramnioblaste a dit :

je vais peut être venir à la permanance ça sera plus facile pour comprendre cette technique ahah

oui on t'aidera avec plaisir à la perm! 

[Claramnioblaste]

Il y a 7 heures, choLOLApine a dit :

oui on t'aidera avec plaisir à la perm! 

génial merciii je viens jeudi alors ahah !!