Couderc exo (oui encore)

[tutoweb]

Hello ! Merci beaucoup aux tuteurs qui répondent malgres les nombreuses questions, merci merci :)

 

1)Pourquoi la D est fausse s'il vous plait? Tout me parait correct? Merci :) 

 

2) Pourquoi la 12D est vraie? Car 2 mois après une modification, ce sera forcement different non? 

Edited January 4, 2022 by PASSnoncodant

[Rom142]

Hello @PASSnoncodant!

 

Pour la 8D, tu vois que dans le surnageant, pour le plasmide 2 il n’y a effectivement pas d’expression de SDF-1. Donc ça veut dire que autour des cellules (le surnageant) SDF-1 n’est pas sécrété alors qu’avant il l’était. Maiiiiiis il peut toujours être présent à l’intérieur de la cellule dans le cytoplasme par exemple. Quand on regarde les cellules lysées (c’est-à-dire les cellules qui ont été déchirées, donc que leur contenu est libéré), on remarque qu’il y a quand même une expression de SDF-1 pour le plasmide 2. L’item D est donc FAUX.

 

Pour la 12D, on dit qu’il devrait y avoir le même Western Blot 2 mois plus tard car le vecteur viral est intégratif. Ça veut dire que l’ADN du vecteur viral va aller s’intégrer directement dans le génome de la cellule-hôte. Il gardera donc les mêmes caractéristiques. 

On pourrait toujours argumenter qu’il pourrait y avoir des mutations modifiant les séquences ADN et introduisant un codon STOP et donc on pourrait avoir un Western Blot différent. Ce n’est pas impossible mais la probabilité d’un tel cas est quand même beauuuucoup plus faible que le cas où rien ne change. L’item D est donc VRAI (mais peut porter à débat).

 

Voilàààà, j’espère que c’est clair. N’hésite pas à poser des questions si tu as un doute ou que j’ai mal expliqué qqc.

Désolé pour le délai de réponse à ta question, ça ne devrait plus être aussi long à l’avenir ! ヾ(•ω•`)o

[Juju_turtle]

Coucou, désolé je m'incruste car j'ai plusieurs questions concernant ces qcms, pour le premier pour l'item A je me demandais, à quoi sert la séquence signal ? 

Pour le qcm 2 j'ai du mal à interpréter le western blot je comprends pas ce qu'on doit regarder et comparer pour répondre aux items B et C...

Si quelqu'un veut bien m'expliquer,

Merci d'avance !

[FabienDespascito]

Salut @Juju_turtle, (j'adore ton pseudo)

Il y a 15 heures, Juju_turtle a dit :

pour le premier pour l'item A je me demandais, à quoi sert la séquence signal ? 

Alors au S1, on a vu en Biocell qu'il existait des séquences signal permettant d'orienter des protéines au niveau de certaines parties de la cellule. Ici c'est seulement une séquence signal, on ne spécifie pas la localisation exacte, donc l'item me parait faux.

Il y a 15 heures, Juju_turtle a dit :

Pour le qcm 2 j'ai du mal à interpréter le western blot je comprends pas ce qu'on doit regarder et comparer pour répondre aux items B et C...

C'est sûr que sans entrainement, les graphiques de recherches sont un peu tordu, n'hésite pas à écrire ce que tu comprends sur le schéma comme ça :

Donc : 

- ABCD ce sont les différentes populations cellulaires que l'on analyse 

- Mq c'est le contrôle il y'en a toujours un,

- A gauche, on voit différents poids moléculaires, car la technique de western blot en gros c'est ça, c'est ranger les protéines en fonction de leurs poids moléculaires

- A droite, il y a les différents facteurs de transcription (des protéines donc) qui sont exprimés, ici ça veut dire que alpha fait 50kDa et ß environ 15kDa, l'actine c'est le contrôle tu t'en occupe pas

 

Donc ce que tu dois comprendre ici, c'est que alpha et ß ne sont présent que au niveau de la population A, car il y a une marque seulement au croisement de la colonne A

 

Donc pour répondre aux items :

L'item B : est faux, car comme je viens de le dire, il n'y a une marque que au niveau de la population cellulaire A, donc pas au niveau des 4 FAUX

L'item C : on te demande si il y a bien eu transfection. Alors ici tu ne vas pas regarder le Western Blot, mais bien le RT PCR, car le Western Blot te dis si il y a la protéine, or ici on veut savoir si il y a eu transfection, donc ça veut dire, est ce que la séquence de gène a bien été transfecté. Le western Blot ne permet pas de le savoir, car même si il n'y a pas de protéine ça ne veut pas dire pour autant que la séquence codant pour la protéine est absente

Tu regarde sur le RT PCR et tu vois que pour les populations ABD, il y a au moins un des deux gènes à chaque fois. Donc ça veut dire qu'il y a bien eu transfection. 

Alors que C on est pas sûr car le RT PCR montre une absence de gène !

 

J'espère que tu as compris, n'hésite pas sinon !

[Juju_turtle]

Wow ta réponses est super claire, merciii ! ( ta PP )

Du coup même si les 2 gènes ne sont pas présents, on peut quand même conclure que la cellule à bien été transfectée ?

En gros en faisant la RT PCR on obtient qu'un bout, c'est ça ?

 

[tutoweb]

merci beaucoup c'est parfait. Juste pour la 12E je n'ai pas bien saisi ce qu'était l'electropermeation, et en quoi on pourrait l'utiliser ici (la E est vraie). Merci!

[FabienDespascito]

Il y a 22 heures, Juju_turtle a dit :

Wow ta réponses est super claire, merciii ! ( ta PP )

Du coup même si les 2 gènes ne sont pas présents, on peut quand même conclure que la cellule à bien été transfectée ?

En gros en faisant la RT PCR on obtient qu'un bout, c'est ça ?

 

Oui car il y a au moins 1 gène présent, donc il y a eu transfection, mais peut être que après la transfection y'a eu un problème qui a fait disparaitre la séquence ß

Il y a 19 heures, PASSnoncodant a dit :

Juste pour la 12E je n'ai pas bien saisi ce qu'était l'electropermeation, et en quoi on pourrait l'utiliser ici (la E est vraie). Merci!

Alors l'électroporation, c'est une technique électrique qui permet de transfecter le plasmide dans la cellule. On a un gène gun qui va cribler la membrane et l'ouvrir en lui faisant des pores. Puis on insère le plasmide

Donc ici, la transfection aurait très bien être faite par électroporation

[Juju_turtle]

Super ! Merci !!