ED 3 QCM 10 item D

[aurionisant]

Bonsoir petite question sur ce QCM : 

L'item D : La mutation peut être détectée par séquençage du produit de PCR (effectuée sur de l’ADN génomique) est VRAI.

Mais ce que j'avais compris c'est que pour détecter la mutation il faut que l'exon 2 soit excisé or si l'amorce est sur l'exon 2 et que la mutation est présente on va pas avoir de produit de séquençage, c'est la justification qu'ils donnent pour li'tem E "La mutation peut être détectée par séquençage du produit de RT-PCR" FAUX. Du coup pourquoi ce n'est pas aussi valable pour la PCR sur ADN génomique ? Etst ce que je me trompe sur comment on détecte la mutation ? Je suis un peu lost. Si c'est pas clair, je veux bien juste peut être un détail sur la logique du processus je pense que ça répondra à mon incompréhension ahah

Merci à mon futur sauveur :)) Je découvre la fonction forum que j'avais pas trop utilisé et c'est le feu à part que j'ai l'impression d'exploité les tuteurs ahah 

 

 

 

Edited December 4, 2021 by auri_culaire

[SBY]

Hello @auri_culaire ! 

Je te mets la réponse que j'avais donné sur un autre post où la question était similaire à la tienne. 

 

Le 23/11/2021 à 13:35, SBY a dit :

En fait, si on suppose que la mutation est une substitution, quand on fera la PCR sur l'ADN, on aura à la fois nos régions codantes et non codantes qui seront amplifiées. C'est juste qu'au niveau de la séquence mutée on aura un T à la place d'un G (c'est un exemple c'est juste pour que ce soit plus concret pour toi) donc pas de changement de taille de l'ADN par rapport à l'individu sain. 

Par contre, si on fait une RT-PCR, on a dit qu'on partait de l'ARNm considéré comme mature. Or, la mutation de l'intron entraine l'excision de l'exon 2. Donc ça veut dire qu'au moment de l'épissage de mon pré-ARNm, on va avoir à la fois l'excision des introns + de l'exon 2. 

 

Si on fait une RT-PCR, comme on n'a pas l'exon 2, une des amorces pourra pas se fixer du coup on n'aura pas de produit d'amplification. Mais on pourra pas savoir si c'est dû à une mutation ou à un problème de manipulation avec par exemple une température trop haute qui favorise pas l'hybridation des amorces. Ainsi, on n'aura pas de produit de RT-PCR et le séquençage ne sera pas possible. 

Par contre si la deuxième amorce s'hybridait au niveau de l'exon 3, là ça fonctionnerait et on détecterait une bande de poids moléculaire plus bas.

 

Mais ici, à cause du positionnement des amorces, le seul moyen de détecter la mutation c'est de faire une PCR, puis de faire un séquençage de notre produit d'amplification et de le comparer à celui d'un individu sain. 

 

C'est mieux pour toi ? 

[aurionisant]

oui merci beaucoup !