PCR RT-PCR

[PASSparFENEU]

salut! 

quelqu'un pourrais me rappeler les réactifs pour une RT_PCR et une PCR 

je me melange souvent entre amorce ARN ou d'ADN etc..

merci 

Edited November 13, 2021 by PASSmuraille

[LSB]

Salut 

Pour une PCR, il te faut des amorces d'ADN,Taq polymérase, tampon et dXTP.

 

Pour la RT-PCR, il te faut faire d'abord une rétrotranscription pour obtenir le cDNA de ton ARN car tu ne peux pas travailler sur un ARN en PCR. Ensuite il te faut donc les mêmes éléments. 

[PASSparFENEU]

d'accord merci par contre j'avais cru comprendre que pour la RT-PCR qu'il fallait tout de même des amorces d'ARN et qu'entends-tu pas "cDNA" pourquoi tu mets un "c" devant ? 

il y a 45 minutes, LSB a dit :

Salut 

Pour une PCR, il te faut des amorces d'ADN,Taq polymérase, tampon et dXTP.

 

Pour la RT-PCR, il te faut faire d'abord une rétrotranscription pour obtenir le cDNA de ton ARN car tu ne peux pas travailler sur un ARN en PCR. Ensuite il te faut donc les mêmes éléments. 

 

[LSB]

il y a 13 minutes, PASSmuraille a dit :

d'accord merci par contre j'avais cru comprendre que pour la RT-PCR qu'il fallait tout de même des amorces d'ARN et qu'entends-tu pas "cDNA" pourquoi tu mets un "c" devant ? 

 

 

Pour la RT-PCR : 

 

Tu as tout d'abord un ARN que tu veux amplifier. Les ARNs sont très fragiles du coup pour les utiliser dans une PCR, tu dois obtenir leurs ADN complémentaires (cDNA) qui sont beaucoup plus stables et sur lesquels tu peux faire ta PCR. Pour cette étape il te faut la reverse transcriptase qui est une ADN poly/ARN dép qui aura souvent comme amorce une séquence polyT car les ARNs sont polyadénilé.