melie Posted October 12, 2015 Posted October 12, 2015 Bonjour! En faisant les qcm d'entrainement je suis tombée sur plusieurs exercices similaires à celui la et impossible d'y repondre. En fait lorsqu'il y a une ligation entre deux fragments je n'arrive pas à comprendre par quelle enzyme il peut etre recoupé ou non et comment? Car dans cet exemple il y a ligation entre le fragment de 6kpb et 4kpb,mais que deviennent les deux fragments de 2 kpb et si on lie les fragments,que deviennent les sites XmaI au niveau de la liaison...? Je suis un peu perdue... Merci d'avance de votre aide En fichier joint,le qcm. ITEM A -> la reaction de ligation s'est faite avec un rendement de 100% ITEM B -> le fragment de 4kpb obtenu apres ligation peut correspondre à la ligation des deux fragments de 2kpb obtenus par la digestion avec XmaI et HindIII ITEM C -> le fragment de 10kpb peut etre clivé lors de son incubation en presence de HindIII ITEM D -> si le fragment de 10 kpb,apres preparation en grande quantité,est incubé en presence de XmaI,les résultats de l'electrophorese (coloration au bromure d'ethydium) doivent etre les suivants : on a une carte de restriction avec deux taches,une a 6kpb et une a 4kpb ITEM E -> les deux fragments de 2kpb peuvent etre marqués au 32P et utilisés dans les expériences de sourthen blotting destinées à detecter la presence du gene normal chez la souris.
Solution alexguigui Posted October 12, 2015 Solution Posted October 12, 2015 en fait lorsque tu as une ligation,tu vas avoir à ce niveau une nouvelle séquence qui peut en fait être reconnue par une enzyme de restriction,dans ce cas tu vois que le fragment de 6kd est coupé par eco et xmaI et celui de 4 par xmal et mscI.Donc tu vois bien que les 2 fragments ont une extremité compatible:XmaI,cest donc par cette extremité qu'il vont pouvoir se raccorder car comme les 2 extremités sont xmaI,elles sont identiques donc compatibles Concernat les fragments de 2kpb,on te dit dans l'énoncé qu'ils ne sont pas utilisé dans la ligature étudiée A-faux car on nous dis qu'il y a des taches à 10kda c est à dire que la ligature a fonctionné,les 2 fragments de 6 et 4 kpb se sont bien ligaturé,mais on te dis qu'il y a des fragments de 6 et 4 kpb,qui sont des fragments qui ne se sont pas ligaturés,donc le rendement n'est pas de 100% B-F car pas utilisé,on te dis qu'on utilise que les fragments de 6 et 4 C-F car celui de 10kpb portent un site Xmal(au niveau de la ligature),or Xmal ce n est pas HindIII donc pas posible D-V (voir toutes les explications) E-V
melie Posted October 13, 2015 Author Posted October 13, 2015 D'accord donc si j'ai bien compris,il peut y avoir ligation de 2 fragments si ils ont été coupés par une meme enzyme de restriction ou bien par 2 enzymes différentes mais compatibles. Par contre la ou j'ai encore un doute c'est comment savoir par quelle enzyme le nouveau fragment peut-il etre recoupé? XmaI me parait logique ici mais si il y avait eu un autre site de restriction par exemple au niveau du fragment de 4kpb ca pourrait aussi le couper?? Merci beaucoup pour ton explication!!
alexguigui Posted October 13, 2015 Posted October 13, 2015 en fait pour voir si le nouveau fragment peut etre recoupé,tu regardes la sequence obtenu apres ligature et tu regarde si elle corrspond a une sequence reconnu par une enzyme de restriction ici tu peut bien recouper par xma ,et si il y a un autre site sur le fragment de 4kpb il pourra aussi etre coupé
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