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TECHNIQUES


Go to solution Solved by FabienDespascito,

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Posted (edited)

Bonsoir 

 

je ne comprend pas pourquoi le "secondairement " dans cette phrase concernant l'hybridation in situ : " les sondes utilisées sont synthétisées avec de nucléotides porteur d'une chaine latérale SECONDAIREMNT révélé= sonde froide" . Et qu'est ce que la biotine ?

Et comment est-il possible que des sonde se fixent sur l'adn en METAPHASE

 

merci d'avance !

Edited by N31100
  • 1 month later...
  • Élu Etudiant
  • Solution
Posted

Salut @N31100

L'hybridation in situ, est une technique de révélation d'une cellule par l'utilisation de l'acides nucléiques. 

Ces acides nucléiques peuvent soit être :

- Constitué de nucléotides radiomarqué (=sonde chaude), donc par autoradiographie (la technique permettant de voir la radioactivité) on va regarder directement notre acide nucléique. (dans le schéma dessous, le marquage est directement sur les nucléotides)

- Constitué de nucléotides lié à une chaine latérale, qui est elle marquée. Donc lorsque tu observe, tu ne vas pas voir directement ton nucléotide, mais bien la chaine latérale lié au nucléotide. C'est une technique indirecte. C'est ce que veux dire ce "secondairement", ce n'est pas le nucléotide qui est marqué, mais une chaine secondaire. 

(Dans le schéma ci dessous, le marquage est indirectement sur les nucléotides)

50ov.jpg

Le 05/11/2021 à 20:55, N31100 a dit :

Et qu'est ce que la biotine ?

La biotine, c'est justement le marquage qui va être détecté dans les sondes froides (c'est le gros rond vert sur le schéma du dessus)

Le 05/11/2021 à 20:55, N31100 a dit :

Et comment est-il possible que des sonde se fixent sur l'adn en METAPHASE

La métaphase, c'est la phase où les chromosomes sont le plus visible, en effet ils sont condensé. Donc c'est le mieux pour les observer

Certaines sondes sont associées à des nucléotides, donc les nucléotides vont se fixer à leur séquence complémentaire, et la sonde va suivre

Sinon d'autre marqueurs sont des intercalants de l'ADN, en gros ils vont se coller entre les acides nucléiques. Et vont marquer le tout (je pense au DAPI, ou au SYBR Green)

 

Désole pour le retard, ton message est passé entre les mailles du filets :"(

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