Western Blot

[clemtlr]

Bonjour, j'envoie ce message car j'ai un peu de mal à comprendre un truc : comment lire les western blot notamment celui ci :

https://tutoweb.org/PDFs/Librairie/Archive PACES/PACES Doublants/Annales 2021/S1/S1 - Concours PACES 2020-2021 sujets et corrections.pdf (page 32, QCM 5 de Biocell)

 

la correction est celle-ci :

https://tutoweb.org/PDFs/Librairie/Archive PACES/PACES Doublants/Annales 2021/S1/Corrections détaillées/S1 - Concours PACES 2020-2021 Corrections détaillées.pdf Page 18 QCM 5

 

Merci d"avance

[FabienDespascito]

Salut @tellierclementine (pseudo très sobre j'aime bien aha)

 

Alors les western blot, c'est sûr que c'est un joyeux bordel, il faut vraiment prendre le tout étape par étape pour cerner le sujet, puis lire les QCMs après. 

Déjà première chose à faire tu lis l'énoncé :

Révélation

Et tu te pose la question : "qu'est ce qu'on me dit là ?", n'ait pas peur des longs paragraphes, essaye de vulgariser le tout, en le reprenant avec tes mots, ou avec un schéma.

Ici : Il y a une protéine X, on l'a mis dans des cellules avec (+) ou sans (-) des des glycosidases. Dès que tu as lu ces informations, essaye de les retrouver dans le schéma 

C'est juste ici :

Révélation

Puis on te dit : qu'on a mis dans un western blot, avec des anticorps, contre la protéine X ou la ß-actine,

Tu peux donc voir le western blot avec les grosses bandes qui permettent de déterminer la taille de ton échantillon, ici ta protéine X

 

Déjà qu'est ce qu'on remarque direct : Que le résultat en WB de la ß-actine ne bouge pas, donc c'est le contrôle, tu ne dois pas en prendre compte.

 

Maintenant que tu as ton schéma, commence à lire les QCMs 

Attention, ne te bloque pas trop longtemps sur l'énoncé, des fois les QCMs permettent de comprendre l'intérêt de l'expérience.

Tes QCMs :

A. Cherche les résultats en WB lorsque tu n'as pas d'enzymes : donc où il y a les 2 moins. Tu vois qu'il y a 2 bandes, et tu vois qu'il y a 2 poids moléculaires, A est donc vrai

B et C, c'est du cour, tu sais que ces enzymes attaque sur différents AA, tu regarde à chaque fois où une enzyme est présente et une est absente. On voit une modification du poids moléculaires, donc BC sont vrai

D. On l'a vu précédemment c'est ton échantillon contrôle, il ne bouge pas. D Vrai

E. Faux, il n'y a pas de clivage à 200kDa, donc le PM reste le même FAUX

 

J'espère que tu as mieux compris, n'hésite pas sinon

[clemtlr]

Merci beaucoup!

Si j'ai bien compris, dans ce cas précis, la fait qu'il y ait séparation (clivage) montre s'il y a N ou O glycolisation c'est ça?

Juste j'ai une question, je comprends pas pourquoi c'est juste pour 230 kDa puisque il n'y a pas de bande noire représentée (item B et C) ?

[FabienDespascito]

Il y a 2 heures, tellierclementine a dit :

Si j'ai bien compris, dans ce cas précis, la fait qu'il y ait séparation (clivage) montre s'il y a N ou O glycolisation c'est ça?

Alors c'est le fait qu'il y a une modification du poids moléculaire lorsqu'on met la N-glycosidase ou la O-glycosidase, qui permet de savoir qu'il y a clivage

Il y a 2 heures, tellierclementine a dit :

uste j'ai une question, je comprends pas pourquoi c'est juste pour 230 kDa puisque il n'y a pas de bande noire représentée (item B et C) ?

Justement il n'y a pas de bande noire, car en présence de ces enzymes, la forme de 230kDa a été clivée, elle ne pèse donc plus que 215kDa

[clemtlr]

j'arrive toujours pas à comprendre...désolée

car au final pour l'item E il y a N-glycolisation non?

[FabienDespascito]

il y a 4 minutes, tellierclementine a dit :

j'arrive toujours pas à comprendre...désolée

car au final pour l'item E il y a N-glycolisation non?

Y'a pas de problème tqt j'aime bien la biocell 

Alors tu as vu qu'il y a toujours une forme 200kDa pour la protéine X, quelque soit les enzymes mises (la N-glycosidase, ou la O-glycosidase, ou aucune des deux). Même lorsque les 2 enzymes sont présentes, on a un trait plus gros, mais ça change rien, ça veut juste dire que la concentration est plus grande

Donc si il y a toujours cette ligne qui représente 200kDa, ça veut dire que jamais cette forme est clivée (même lorsqu'on met les 2 enzymes)

 

En gros, on peut voir que les enzymes coupent chacune et enlève 15kDa à la protéine (de 230kDa elle passe à 215kDa en présence d'une enzyme; et de 215kDa elle passe à 200kDa avec les deux enzymes)

Toute fois, elle ne descend jamais en dessous de 200kDa, donc ça veut dire que cette forme n'est jamais clivé, donc elle n'est jamais N-Glycosylée.

Tu comprends ? 

[FabienDespascito]

Il y a 17 heures, FabienDecapitation a dit :

Y'a pas de problème tqt j'aime bien la biocell 

Alors tu as vu qu'il y a toujours une forme 200kDa pour la protéine X, quelque soit les enzymes mises (la N-glycosidase, ou la O-glycosidase, ou aucune des deux). Même lorsque les 2 enzymes sont présentes, on a un trait plus gros, mais ça change rien, ça veut juste dire que la concentration est plus grande

Donc si il y a toujours cette ligne qui représente 200kDa, ça veut dire que jamais cette forme est clivée (même lorsqu'on met les 2 enzymes)

 

En gros, on peut voir que les enzymes coupent chacune et enlève 15kDa à la protéine (de 230kDa elle passe à 215kDa en présence d'une enzyme; et de 215kDa elle passe à 200kDa avec les deux enzymes)

Toute fois, elle ne descend jamais en dessous de 200kDa, donc ça veut dire que cette forme n'est jamais clivé, donc elle n'est jamais N-Glycosylée.

Tu comprends ? 

@tellierclementine Ça va ? T’as pas mis fin à tes jours à cause de la biocell ?

Passe à une autre matière ou un autre chapitre et reviens y dans 1 semaine 

Bonne chance