Lélie Posted October 30, 2021 Posted October 30, 2021 Bonjour, est ce qu'il serait possible de m'expliquer la méthode de purification des protéines svp avec le SDS page que je n'arrive pas trop à comprendre Merci Quote
Ancien du Bureau Solution Sioplèt Posted October 30, 2021 Ancien du Bureau Solution Posted October 30, 2021 Salut ! Le SDS PAGE a pour but de dénaturer des protéines et de les séparer selon leur PM apparent En gros : - On a un échantillon qui provient d'une expérience (comme une centrifugation etc) - On dénature (en rompant les interactions moléculaires) en mélangeant l'échantillon avec un tampon de dénaturation qui contient : SDS -> Dépliement des protéines et enrobage par des charges négatives ß-mercapto-éthanol -> Rompt les ponts disulfures Glycérol -> Facilite le dépôt de l’échantillon dans le puit en le rendant plus dense Bleu de bromophénol -> Colore l’échantillon pour visualiser la migration - Ensuite on chauffe pour assurer la dénaturation - On dépose les échantillons dans les puits - On fait migrer en branchant des électrodes aux extrémités du gel Ainsi, comme les protéines sont toutes chargées négativement par le SDS, elles vont migrer dans le même sens (donc vers l'anode en bas du gel) Les protéines les plus légères migrent le plus loin (car elles ont plus de facilités à se déplacer dans le gel) - Ensuite on fait une coloration pour révéler toutes les protéines - Puis si on veut détecter une protéine radioactive on fait une autoradiographie, et sinon on peut faire Western Blot etc etc nemnémo-raux, zzzz and Lélie 2 1 Quote
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