PCR

[lilarsenic]

Bonjour!

 

Je comprends pas pourquoi cet item à propos de la technique PCR est compté vrai : "Dans cette technique, on sépare les brins "matrices" et les brins néosynthétisés par chauffage (95°C environ)."

 

Je pensais que l'étape de dénaturation consistait à séparer les 2 brins matrices uniquement, les brins néosynthétisés n'étant pas encore synthétisés à ce moment-là ? De plus, il me semble pas qu'il y ait une étape dans laquelle on sépare les brins néosythétisés par chauffage... J'ai sûrement loupé quelque chose..

 

Aussi, un un autre item compté juste dit que la RT-PCR nécessite une DNA-polymérase DNA-dépendante mais il me semblait que pour cette technique, on avait besoin d'une ADN polymérase ARN dépendante pour transformer l'ARN en ADN par une activité réverse transcriptase. Du coup, quand est-ce qu'intervient l'ADN polymérase ADN dépendante ?

 

Merci d'avance pour l'éclaircissement ! 

 

Edited October 23, 2021 by lila

[virasolelh]

hello @lila

 

alors oui, à la première dénaturation de la PCR, on sépare deux brins matrice. cela permet, lors de l'étape d'élongation, après hybridation, la formation de brins néosynthétisés. sauf qu'on veut obtenir de nombreux brins, donc on va répéter ces cycles de nombreuses fois (30-50 fois en général). ce qui fait qu'au deuxième cycle, tu auras à séparer des brins matrices et des brins néosynthétisés. la question est un peu piège je trouve

 

la PCR se fait sur de l'ADN. on utilise la Taq polymérase (dans la très grande majorité des cas), qui est une ADN polymérase ADN dépendante 

en RT-PCR, on utilise d'abord une ADN-synthétase ARN dépendante pour "transformer" une séquence ARN en une séquence ADN, qu'on pourra polymériser par la Taq :)))

[lilarsenic]

Ah super j'ai tout compris merci des explications