Concours blanc 2013,qcm 12,Sourthen Blot!

[melie]

Coucou!

 

J'ai un gros soucis avec le qcm 12 de l'annale de concours blanc de 2013,j'ai relu l'énoncé plusieurs fois mais rien n'y fait je ne comprends pas du tout comment résonner. Quelqu'un peut-il m'aider...?

 

Merci d'avance

 

 

[Eline]

Salut !

 

Il faut bien relire l'énoncé et prendre toutes les infos

D'après l'énoncé on sait que:

-MspI coupe CCGG méthylé ou non méthylé

-HpaII coupe CCGG non méthylé

-l'allèle muté CCAG ne sera coupé par aucun des deux

L'individu A est hétérozygote muté (CCGG/CCAG) non méthylé et l'individu B est homozygote normal (CCGG/CCGGm) avec un allèle méthylé. 

 

Si l'enzyme coupe tu auras une bande de 150pb (plusieurs bandes au même niveau), sinon une de 300pb. 

Pour chaque cas de figure tu peux prendre les conditions de la proposition et voir si ça match avec les résultats proposés.

 

J'espère avoir répondu à ta question !

[JulieFinkel]

Salut !

Je vais tenter de reprendre l'énoncé point par point pour te montrer le raisonnement mais n'hésite pas à me dire si ce n'est toujours pas clair pour toi !

Tout d'abord, on te parle de deux enzymes de restriction (qui sont des endonucléases, c'est à dire qu'elles coupent à l'intérieur d'un brin d'ADN) qui sont MspI et HpaII. On te signale qu'elles reconnaissent toutes les deux la séquence CCGG, c'est à dire qu'elles vont couper le brin à chaque fois qu'il y a cette séquence.

 

Ensuite on te présente différentes situations :

- L'individu A : Il possède 2 allèles différents, et l'on précise que les cytosines ne sont pas méthylées (car tu as vu dans ton cours que dans certains cas on avait des cytosines méthylées, mais pas là du coup) :

• L'un de ses allèles est normal, un bout de sa séquence est représentée juste sous le schéma avec tous les pics que tu as dans l'énoncé. On voit qu'on retrouve la séquence "CCGG".
• On te dit que sur l'autre allèle on a une mutation (donc à l'état hétérozygote car elle ne touche qu'un allèle sur les deux) où un des G de la séquence "CCGG" est transformé en A. Donc on a une perte de la séquence "CCGG"

- L'individu B : Il possède les deux allèles normaux (donc il n'a pas la mutation G --> A comme l'individu A a sur un de ses allèles) mais qui ont une méthylation des cytosines différente :

• L'un des allèles n'a pas la méthylation des cytosines : on aura donc la séquence CCGG sans méthylation des cytosines
• Sur l'autre allèle, les cytosines seront méthylées et donc on aura la séquence CCGG avec méthylation des cytosine

On sait de plus grâce à l'énoncé que :

- MspI reconnait le site CCGG et va couper le brin à ce niveau, que les cytosines soient méthylées ou non

- HpaII reconnaît le site CCGG et va couper seulement si les cytosines ne sont pas méthylées

- La protéine X reconnaît la séquence ATCCGGGGAT et se fixe sur le brin seulement si les cytosines de cette séquence ne sont pas méthylées.

 

Faisons donc une étude de chaque cas :

- Pour l'individu A :

• MspI : Pour l'allèle normal, MspI va reconnaître la séquence CCGG et couper à ce niveau. Comme la séquence CCGG n'est présente qu'une seule fois sur cet allèle (comme il l'est dit dans l'énoncé), on aura une seule coupure. Pour l'allèle muté, MspI ne coupera rien du tout car on a une perte de la séquence CCGG due à la mutation G --> A (on a donc CCAG et l'enzyme de restriction ne reconnaît pas ce site).
• HpaII : Pour l'allèle normal, HpaII va reconnaître la séquence CCGG et couper à ce niveau car les cytosines ne sont pas méthylées. Pour l'allèle muté, HpaII ne coupera rien car on a une perte de la séquence CCGG due à la mutation G --> A.
• Protéine X : La protéine X ne se fixera que sur l'allèle normal car on y retrouve la séquence "ATCCGGGGAT" qui est non méthylée. En revanche, elle ne se fixera pas sur l'autre allèle car la mutation G --> A fait qu'on a "ATCCAGGGAT" et donc la protéine X ne reconnaît pas cette séquence.

--> Pour l'individu A on aura donc :

• MspI : Une bande à 150 pb (traduisant le fait qu'il y a eu un phénomène de coupure) + une bande à 300pb (correspondant à l'allèle qui n'a pas été coupé)
• HpaII : Idem
• Protéine X: se fixe sur un seul des deux allèles (le normal)

- Pour l'individu B :

• MspI : Elle coupera une fois au niveau de chaque allèle car les deux allèles possèdent la séquence CCGG et MspI coupe que les cytosines soient méthylées ou non
• HpaII : Elle coupera seulement le brin où les cytosines ne sont pas méthylées, et laissera le brin comportant les cytosines méthylées intact
• Protéine X: Elle se fixera sur l'allèle où les cytosines ne sont pas méthylées, mais pas sur l'autre car la protéine X reconnaît la séquence dite seulement si celle ci n'est pas méthylée.

--> Pour l'individu B on aura donc: 

• MspI : Seulement une bande de 150 car les deux allèles ont été coupées
• HpaII : Une bande à 150 pb et une bande à 300 pb car seul un des deux allèles a été coupé
• Protéine X: Elle se fixera seulement sur un des deux allèles

 

Au vu de ces analyses tu peux en déduire que les réponses sont ABCE.

 

Voilà, j'espère que j'ai été claire et que ça t'a aidée !

[JulieFinkel]

Après comme le dit Eline tu peux directement regarder si la proposition de l'énoncé colle avec les données de l'énoncé, mais là c'était pour bien te détailler le raisonnement .

[melie]

Merci beaucoup à toutes les deux! C'est tres clair et tres bien expliqué! Vous m'avez été d'une grande aide!!!!!