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immuno fixation/empreinte


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  • Ancien Responsable Matière
Posted

Salut! Quelqu'un saurait me faire un recap sur les techniques d'immuno-fixation et d'immuno-empreinte, je crois que j'ai pas bien saisi comment elles marche et leur différences surtout, mercii

  • Solution
Posted (edited)

Coucouuu @nell-de-poule !

 

Alors pour l'immunofixation :

- tu mets tes protéines sériques sur un gel d'électrophorèse pour les faire migrer (de l'anode vers la cathode)

- ensuite tu les révèles par coloration (au bleu de Coomassie en général)

- puis tu ajoute des ac anti-protéines sériques pour induire une immunoprécipitation -> comme ça tu peux savoir à quel pic correspond chaque protéine

image.png.ccb2ef22d12fd333a87dad0bc40d3cd2.png

 

Pour l'immunoempreinte :

- tu peux commencer de 2 façons 

         o  soit tu fais un Dot Blot : tu déposes tes ag sur une membrane de nitrocellulose sans séparation préalable

         o  soit tu fais un Western Blot : tu sépares d'abord par électrophorèse bidimensionnelle ou SDS-PAGE et tu transfères sur membrane

- et ensuite tu révèles le tout par marquage indirect avec des ac secondaires couplés à une enzyme

 

Du coup la principale différence c'est la méthode de révélation : précipitation ou marquage 

 

J'espère que c'est assez clair et bon courage ! 💪💚

 

Edited by Nezuko

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