Plasmides

[abdel_hdj]

bonjour

Comment on faire pour ce genre d'exo svp 

[TACKycardie]

Salut, je vais essayer de t'aider même si mes souvenirs ne sont pas très frais haha.

 

A) Il faut toujours que tu repères les mots importants de l'énoncé qui te permette de comprendre ce que l'on souhaite faire. Ici tu as "bactéries transformées" et "résistance à la kanamycine", donc ici ce qu'il faut se dire, c'est tout simplement "est-ce que dans mon plasmide recombinant j'aurai un ADNc qui code pour la résistance à la kanamycine ?", et secondairement "est-ce que le promoteur correspondant sera adapté ?". Ici tu peux voir que dans ta construction tu auras bien l'ADNc codant la résistance à la kanamycine, et le promoteur est procaryote ce qui est exactement ce qu'il nous fallait étant donné qu'on veut transformer une bactérie. Donc ici l'item est vrai. (Souvent le Pr. Couderc pour piéger sur ce genre d'item elle met "eucaryote" à la place de procaryote).

 

B) Malheureusement, cette année la partie sur l'orientation du clonage était hors programme pour nous les pass. Si je devais résonner juste avec ma logique je te dirais que l'item est faux pour moi étant donné qu'on utilise la même enzyme de restriction de chaque côté de l'ADNc codant la B-globine, donc que le clonage ne me semble pas orienté. Mais encore une fois je ne peux pas te garantir de ma réponse car je n'ai pas eu le cours sur cette partie là cette année dsl.

 

C) Ici c'est un petit calcul à faire.

On va d'abord calculer la taille de l'ADNc codant la B-globine. On te dit que la restriction est faite avec BamH1, or tu peux voir que BamH1 coupe à 3600 et à 4600 pb, on va récupérer ce qui se trouve entre les deux, donc 4600-3600 = 1000 pb.

Ensuite on va regarder lorsque l'on rajoute ces 1000 pb quelle sera la taille du nouveau plasmide. Tu vois que pRH fait 4500 pb, si on y ajoute les 1000 pb de l'ADNc codant la B-globine on se retrouve avec 4500 + 1000 = 5500 donc l'item est faux.

 

D) Encore une fois ici il est question de promoteur. Pour qu'un organisme exprime un gène il faut que celui-ci soit précédé d'un promoteur adéquat. Ici rappelle toi on te dit que le clonage va être fait avec BAMH1, si tu vas repérer sur le plasmide receveur (càd pRH) l'endroit ou va agir BAMH1 pour permettre l'insertion de notre ADNc codant la B-globine, tu peux voir que l'insertion se fera sous la dépendance d'un promoteur eucaryote constitutif, or tu sais que les bactéries sont des organismes procaryotes, ils n'exprimeront donc pas la B-globine. L'item est donc faux.

 

E) Même résonnement qu'à la A), sauf qu'ici on te demande si les cellules eucaryotes transfectées pourront être sélectionnées à l'aide de la zéocine. Tu te poses les mêmes questions que je t'ai souligné à la A) et tu peux voir que l'ADNc codant la résistance à la zéocine ne sera pas présent dans ton nouveau plasmide recombinant car hormis l'ADNc codant la B-globine, on ne va rien récupérer d'autre du plasmide de gauche (tu le sais en regardant les sites de restriction de BAMH1 comme on l'a vu à la C) ). Donc ici aussi l'item est faux.

 

Voilà j'espère que j'ai pu t'être utile et t'aider à mieux comprendre comment résoudre ce genre d'exercice, en tout cas une fois que tu auras acquis la méthode tu verras que c'est toujours le même résonnement, surtout si tu as le Pr. Couderc.

 

Si tu as d'autres questions n’hésite pas.

 

Bon courage !

[Juliette82]

Salut ! 
Donc pour les items A, C, D et E @TACKycardie a raison. Après @TACKycardie c’est super gentil de ta part de vouloir aider en répondant aux questions mais fais attention vous avez pas le même programme, mais merci d’aider 

Pour le B @abdel_hdj on te dit qu’on coupe avec BamH1, donc de chaque côté de ton fragment tu auras les mêmes extrémités car coupées avec la même enzyme, ce qui fait que quand tu veux l’insérer dans ton plasmide tu peux l’insérer dans un sens comme de l’autre, donc ce n’est pas un clonage orienté. 

[abdel_hdj]

il y a 39 minutes, TACKycardie a dit :

Salut, je vais essayer de t'aider même si mes souvenirs ne sont pas très frais haha.

 

A) Il faut toujours que tu repères les mots importants de l'énoncé qui te permette de comprendre ce que l'on souhaite faire. Ici tu as "bactéries transformées" et "résistance à la kanamycine", donc ici ce qu'il faut se dire, c'est tout simplement "est-ce que dans mon plasmide recombinant j'aurai un ADNc qui code pour la résistance à la kanamycine ?", et secondairement "est-ce que le promoteur correspondant sera adapté ?". Ici tu peux voir que dans ta construction tu auras bien l'ADNc codant la résistance à la kanamycine, et le promoteur est procaryote ce qui est exactement ce qu'il nous fallait étant donné qu'on veut transformer une bactérie. Donc ici l'item est vrai. (Souvent le Pr. Couderc pour piéger sur ce genre d'item elle met "eucaryote" à la place de procaryote).

 

B) Malheureusement, cette année la partie sur l'orientation du clonage était hors programme pour nous les pass. Si je devais résonner juste avec ma logique je te dirais que l'item est faux pour moi étant donné qu'on utilise la même enzyme de restriction de chaque côté de l'ADNc codant la B-globine, donc que le clonage ne me semble pas orienté. Mais encore une fois je ne peux pas te garantir de ma réponse car je n'ai pas eu le cours sur cette partie là cette année dsl.

 

C) Ici c'est un petit calcul à faire.

On va d'abord calculer la taille de l'ADNc codant la B-globine. On te dit que la restriction est faite avec BamH1, or tu peux voir que BamH1 coupe à 3600 et à 4600 pb, on va récupérer ce qui se trouve entre les deux, donc 4600-3600 = 1000 pb.

Ensuite on va regarder lorsque l'on rajoute ces 1000 pb quelle sera la taille du nouveau plasmide. Tu vois que pRH fait 4500 pb, si on y ajoute les 1000 pb de l'ADNc codant la B-globine on se retrouve avec 4500 + 1000 = 5500 donc l'item est faux.

 

D) Encore une fois ici il est question de promoteur. Pour qu'un organisme exprime un gène il faut que celui-ci soit précédé d'un promoteur adéquat. Ici rappelle toi on te dit que le clonage va être fait avec BAMH1, si tu vas repérer sur le plasmide receveur (càd pRH) l'endroit ou va agir BAMH1 pour permettre l'insertion de notre ADNc codant la B-globine, tu peux voir que l'insertion se fera sous la dépendance d'un promoteur eucaryote constitutif, or tu sais que les bactéries sont des organismes procaryotes, ils n'exprimeront donc pas la B-globine. L'item est donc faux.

 

E) Même résonnement qu'à la A), sauf qu'ici on te demande si les cellules eucaryotes transfectées pourront être sélectionnées à l'aide de la zéocine. Tu te poses les mêmes questions que je t'ai souligné à la A) et tu peux voir que l'ADNc codant la résistance à la zéocine ne sera pas présent dans ton nouveau plasmide recombinant car hormis l'ADNc codant la B-globine, on ne va rien récupérer d'autre du plasmide de gauche (tu le sais en regardant les sites de restriction de BAMH1 comme on l'a vu à la C) ). Donc ici aussi l'item est faux.

 

Voilà j'espère que j'ai pu t'être utile et t'aider à mieux comprendre comment résoudre ce genre d'exercice, en tout cas une fois que tu auras acquis la méthode tu verras que c'est toujours le même résonnement, surtout si tu as le Pr. Couderc.

 

Si tu as d'autres questions n’hésite pas.

 

Bon courage !

Bonjour,c'etait top merci

oui j'ai une petite question, c'est justement la suite de l'exo, la question 2 du concours mararicher 2018, j'ai pas compris leur correction du coup comment repondre 

[Juliette82]

Est ce que tu peux mettre la photo du sujet stp et de la correction aussi si tu peux comme ça je te l’explique ça sera plus pratique pour moi au lieu de chercher le sujet 

Edited April 24, 2021 by Juliette82

[TACKycardie]

il y a 3 minutes, abdel_hdj a dit :

Bonjour,c'etait top merci

oui j'ai une petite question, c'est justement la suite de l'exo, la question 2 du concours mararicher 2018, j'ai pas compris leur correction du coup comment repondre

De rien c'est avec plaisir.

@Juliette82 merci pour ta confirmation effectivement nous n'avons pas exactement le même programme ce qui justifie que je lui ai dit que je ne garantissais pas ma réponse à la B mais finalement mon intuition était bonne mais merci pour la confirmation.

[abdel_hdj]

il y a 3 minutes, Juliette82 a dit :

Est ce que tu peux mettre la photo du sujet stp et de la correction aussi si tu peux comme ça je te l’explique ça sera plus pratique pour moi au lieu de chercher le sujet 

Salut , je vais essayer mais les captures sont trop lourdes je pense

[TACKycardie]

Utilise zupimage

[abdel_hdj]

il y a 3 minutes, TACKycardie a dit :

Utilise zupimage

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/r1b5.png

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/gwrl.png

Merci

il y a 10 minutes, Juliette82 a dit :

Est ce que tu peux mettre la photo du sujet stp et de la correction aussi si tu peux comme ça je te l’explique ça sera plus pratique pour moi au lieu de chercher le sujet 

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/r1b5.png

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/gwrl.png

il y a 11 minutes, Juliette82 a dit :

Est ce que tu peux mettre la photo du sujet stp et de la correction aussi si tu peux comme ça je te l’explique ça sera plus pratique pour moi au lieu de chercher le sujet 

et voila la correction

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/fftu.png

[Juliette82]

Alors déjà le plus simple dans ce genre d’exercice c’est de dessiner sur ton brouillon à côté ton plasmide recombinant en plaçant dessus tous les sites de restrictions et à quel nombre de pb ils sont placé (je te met l’exemple pour le plasmide recombinant avec l’insert dans le bon sens https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/oo89.jpeg). De là, tu calcule avec tes sites de restrictions, si tu coupes tu obtiendrais des fragments de combien. Tu dois faire la même chose avec ton plasmide recombinant mais qui a l’insert dans le mauvais sens car comme vu dans le QCM1 on peut avoir l’insert dans les deux sens. Donc ça c’est pour ton plasmide recombinant.
Tu calcules aussi avec ton plasmide de départ sans le fragment ajouté, si tu coupes ça te donne quoi, vu qu’il y a qu’un site de restriction pour chaque enzyme ca coupe qu’une fois et donc t’as ton plasmide en entier.

Tout ce travail c’est les valeurs que tu trouves dans le tableau de la correction. De là il te reste qu’a faire de la lecture de données pour répondre. 

A: vrai car si le plasmide était pas recombinant tu aurait qu’un fragment (un site de restriction) alors que si le plasmide est recombinant tu auras deux fragments (2 sites de restrictions). 

 

B : c’est faux tu le vois dans tes calculs, que tu aies l’insert orienté ou non orienté, après digestion par EcoR1 tu obtiens le même nombre de fragments et de même taille. 

 

 C : pour avoir la transcription il faut que ton insert soit dans le bon sens pour ça il faut que tu regardes la digestion par HindIII, et tu vois que c’est pas  le cas donc il va pas y avoir transcription c’est donc faux (quand digestion par HindIII on aura pas les mêmes tailles de fragments si c’est orienté ou non) 
 

D : vrai tu regardes une fois encore HindIII et tu vois que l’insert est dans le bon sens donc transcription. 
 

E : on te dit dans l’énoncé que la protéines est cytosolique donc tu la retrouveras pas en dehors de la cellule dans le surnageant donc c’est faux 

[abdel_hdj]

il y a 10 minutes, Juliette82 a dit :

Alors déjà le plus simple dans ce genre d’exercice c’est de dessiner sur ton brouillon à côté ton plasmide recombinant en plaçant dessus tous les sites de restrictions et à quel nombre de pb ils sont placé (je te met l’exemple pour le plasmide recombinant avec l’insert dans le bon sens https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/oo89.jpeg). De là, tu calcule avec tes sites de restrictions, si tu coupes tu obtiendrais des fragments de combien. Tu dois faire la même chose avec ton plasmide recombinant mais qui a l’insert dans le mauvais sens car comme vu dans le QCM1 on peut avoir l’insert dans les deux sens. Donc ça c’est pour ton plasmide recombinant.
Tu calcules aussi avec ton plasmide de départ sans le fragment ajouté, si tu coupes ça te donne quoi, vu qu’il y a qu’un site de restriction pour chaque enzyme ca coupe qu’une fois et donc t’as ton plasmide en entier.

Tout ce travail c’est les valeurs que tu trouves dans le tableau de la correction. De là il te reste qu’a faire de la lecture de données pour répondre. 

A: vrai car si le plasmide était pas recombinant tu aurait qu’un fragment (un site de restriction) alors que si le plasmide est recombinant tu auras deux fragments (2 sites de restrictions). 

 

B : c’est faux tu le vois dans tes calculs, que tu aies l’insert orienté ou non orienté, après digestion par EcoR1 tu obtiens le même nombre de fragments et de même taille. 

 

 C : pour avoir la transcription il faut que ton insert soit dans le bon sens pour ça il faut que tu regardes la digestion par HindIII, et tu vois que c’est pas  le cas donc il va pas y avoir transcription c’est donc faux (quand digestion par HindIII on aura pas les mêmes tailles de fragments si c’est orienté ou non) 
 

D : vrai tu regardes une fois encore HindIII et tu vois que l’insert est dans le bon sens donc transcription. 
 

E : on te dit dans l’énoncé que la protéines est cytosolique donc tu la retrouveras pas en dehors de la cellule dans le surnageant donc c’est faux 

Merci je comprends déjà mieux

je ne sais pas si c'est fais exprès mais tu peux envoyer la photo de ta feuille dans son intégralité stp?

et je comprends pas prq  eco bam et hind gardent les mêmes valeurs alors que tout le reste change?

et je ne vois pas d'où sort le 1020

merci beaucoup

[Juliette82]

il y a 6 minutes, abdel_hdj a dit :

et je comprends pas prq  eco bam et hind gardent les mêmes valeurs alors que tout le reste change?

C’est à dire ? Je ne comprends pas trop ta question; si tu parles des premiers sites de restrictions c’est parce qu’ils sont avant l’insertions de ton fragment du premier plasmide qui contient le gène que tu veux. Ce fragment en l’insérant va tout décaler et te rajouter de nouveaux sites de restriction donc tu calcules leur places après insertion ce qui te donne leur nouvelles valeurs (j’ai surligné l’insert en violet)

il y a 6 minutes, abdel_hdj a dit :

1020

Quel 1020 ? L’emplacement du deuxième HindIII ? 

[abdel_hdj]

il y a 8 minutes, Juliette82 a dit :

C’est à dire ? Je ne comprends pas trop ta question; si tu parles des premiers sites de restrictions c’est parce qu’ils sont avant l’insertions de ton fragment du premier plasmide qui contient le gène que tu veux. Ce fragment en l’insérant va tout décaler et te rajouter de nouveaux sites de restriction donc tu calcules leur places après insertion ce qui te donne leur nouvelles valeurs (j’ai surligné l’insert en violet)

Quel 1020 ? L’emplacement du deuxième HindIII ? 

ce que je ne comprends pas par exemple pourquoi le Nco1 passe a 3100 alors que EcoR1 reste a 800, et je ne comprends pas comment t'a trouvé 1020 pour HindIII, et comment t'a fait pour le non intégrée

je suis vraiment désolé j'en demande trop mais j'arrive juste pas a voir pourquoi

[Juliette82]

En gros t’as ton plasmide de départ dans l’enoncé celui de Droite. Tu sais que dans ce plasmide au niveau du site BamH1 tu vas couper et rajouter ton fragment du premier plasmide qui fait 1000pb donc dans ton plasmide tout ce qui se trouve après va avoir prit 1000pb car ils sont 1000pb de bases plus loin (le cas de xho1, Mlu1, Nco1 et Not1) 

Pour calculer la place du 2e HindIII et EcoR1, tu sais que sur ton insert : 

- HindIII est à 200pb de BamH1 

- EcoR1 est à 500pb de BamH1 

de la tu calcules

tu sais que BamH1 est à 820pb donc HindIII sera à 1020 et EcoR1 à 1320pb 

 

C.’est plus clair ? Si tu comprends toujours pas dessines les étapes sur ton brouillon : l’insert tout seul, le plasmide 2 ouvert au niveau BamH1 et après insertion de l’insert dans le plasmide 

 

[abdel_hdj]

il y a 16 minutes, Juliette82 a dit :

En gros t’as ton plasmide de départ dans l’enoncé celui de Droite. Tu sais que dans ce plasmide au niveau du site BamH1 tu vas couper et rajouter ton fragment du premier plasmide qui fait 1000pb donc dans ton plasmide tout ce qui se trouve après va avoir prit 1000pb car ils sont 1000pb de bases plus loin (le cas de xho1, Mlu1, Nco1 et Not1) 

Pour calculer la place du 2e HindIII et EcoR1, tu sais que sur ton insert : 

- HindIII est à 200pb de BamH1 

- EcoR1 est à 500pb de BamH1 

de la tu calcules

tu sais que BamH1 est à 820pb donc HindIII sera à 1020 et EcoR1 à 1320pb 

 

C.’est plus clair ? Si tu comprends toujours pas dessines les étapes sur ton brouillon : l’insert tout seul, le plasmide 2 ouvert au niveau BamH1 et après insertion de l’insert dans le plasmide 

 

Merci beaucoup, explique comme ca c'est plus simple, j'ai réussis a refaire le plasmide oriente

est ce que tu pourra me donner l'astuce pou trouver celui dans le mauvais sens stp?

désolé 

[abdel_hdj]

il y a 32 minutes, abdel_hdj a dit :

Merci beaucoup, explique comme ca c'est plus simple, j'ai réussis a refaire le plasmide oriente

est ce que tu pourra me donner l'astuce pou trouver celui dans le mauvais sens stp?

désolé 

expliqué * 

[cassolnousmanque]

il y a 35 minutes, abdel_hdj a dit :

est ce que tu pourra me donner l'astuce pou trouver celui dans le mauvais sens stp?

désolé 

quand un fragment est inséré dans le mauvais sens dans un plasmide, c'est quand la traduction de ce fragment ne peut pas se faire

par exemple dans cet exemple (c'est pas le même que le tien mais ça permet de bien illustrer le propos https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/phm1.png) tu vois que le promoteur dans la dernière figure est inséré dans le mauvais sens et pointe vers la gauche donc vers le terminateur, ce qui ne permet pas ni de transcrire l'ADNc de phospho, ni de le traduire par la suite (vu que la transcription n'est déjà pas possible) => donc déjà sur un dessin tu le vois comme ça 

 

maintenant, si tu utilises des enzymes de restriction (donc dans cet exemple, Not1), tu vois que la taille des fragments que tu vas obtenir sera différente selon le sens d'insertion donc ça te permet de savoir si le fragment (ici le promoteur) est bien inséré ou non 

[abdel_hdj]

il y a 18 minutes, cassolnousmanque a dit :

quand un fragment est inséré dans le mauvais sens dans un plasmide, c'est quand la traduction de ce fragment ne peut pas se faire

par exemple dans cet exemple (c'est pas le même que le tien mais ça permet de bien illustrer le propos https://zupimages.net/viewer.php?id=21/16/phm1.png) tu vois que le promoteur dans la dernière figure est inséré dans le mauvais sens et pointe vers la gauche donc vers le terminateur, ce qui ne permet pas ni de transcrire l'ADNc de phospho, ni de le traduire par la suite (vu que la transcription n'est déjà pas possible) => donc déjà sur un dessin tu le vois comme ça 

 

maintenant, si tu utilises des enzymes de restriction (donc dans cet exemple, Not1), tu vois que la taille des fragments que tu vas obtenir sera différente selon le sens d'insertion donc ça te permet de savoir si le fragment (ici le promoteur) est bien inséré ou non 

Merci mais le ccb n'est vraiment pas clair, j'ai beau essayé je ne retrouve pas, alors que pour l'exo que j'ai poste j'y arrive

à l’instant, abdel_hdj a dit :

Merci mais le ccb n'est vraiment pas clair, j'ai beau essayé je ne retrouve pas, alors que pour l'exo que j'ai poste j'y arrive

sauf pour le mauvais sens je n'y arrive toujours pas

[cassolnousmanque]

il y a 12 minutes, abdel_hdj a dit :

Merci mais le ccb n'est vraiment pas clair, j'ai beau essayé je ne retrouve pas, alors que pour l'exo que j'ai poste j'y arrive

si tu veux j'ai fait une correction détaillée de ça donc je peux te l'envoyer si vraiment tu trouvais pas ça clair 

 

il y a 13 minutes, abdel_hdj a dit :

sauf pour le mauvais sens je n'y arrive toujours pas

je vais regarder ton exo et je reviens vers toi 

[abdel_hdj]

à l’instant, cassolnousmanque a dit :

si tu veux j'ai fait une correction détaillée de ça donc je peux te l'envoyer si vraiment tu trouvais pas ça clair 

 

je vais regarder ton exo et je reviens vers toi 

merci

[cassolnousmanque]

Il y a 1 heure, abdel_hdj a dit :

Merci beaucoup, explique comme ca c'est plus simple, j'ai réussis a refaire le plasmide oriente

est ce que tu pourra me donner l'astuce pou trouver celui dans le mauvais sens stp?

désolé

alors pour dessiner le plasmide avec le fragment orienté dans le mauvais sens, tu regarde déjà dans le pBetaGlobine à quel niveau sont placées les enzymes de restriction du fragment que tu vas enlever et transfecter 

 

donc ici tu vois que dans le pBetaGlobine :

BamH1(1) est à 3600 pb 

HindIII est à 3800 pb 

EcoR1 est à 4100 pb 

BamH1(2) est à 4600 pb 

 

donc une fois que tu sais ça et que tu vois que dans pRH on va couper aussi par BamH1 à 820 pb pour insérer le fragment alors tu as 2 possibilités, soit le fragment s'insère dans le bon sens et donc les enzymes de restriction seront placées comme ça :

 

BamH1(1) : 820 pb 

HindIII : 820 + 200 = 1020 pb (vu qu'il y a 200 pb entre BamH1 et HindIII cf 3800-3600 = 200) 

EcoR1 : 820 + 500 = 1320 pb (4100 - 3600 = 500)

BamH1(2) : 820 + 1000 = 1820 pb (4600-3600 = 1000)

 

et si au contraire le fragment s'insère dans le mauvais sens, alors tu auras 

BamH1(2) : 820 pb

EcoR1 : 820 + 500 = 1320 pb (4600-4100 = 500 pb)

HindIII : 820 + 800 = 1620 pb (4600 - 3800 = 800 pb)

BamH1(1) : 820 + 1000 = 1820 pb (4600 - 3600 = 1000 pb)

 

=> en fonction de la taille des fragments que tu obtiens, tu sauras si le fragment est inséré dans le bon ou dans le mauvais sens 

 

dis moi si ça répond à ta question 

Edited April 24, 2021 by cassolnousmanque

[abdel_hdj]

il y a 34 minutes, cassolnousmanque a dit :

alors pour dessiner le plasmide avec le fragment orienté dans le mauvais sens, tu regarde déjà dans le pBetaGlobine à quel niveau sont placées les enzymes de restriction du fragment que tu vas enlever et transfecter 

 

donc ici tu vois que dans le pBetaGlobine :

BamH1(1) est à 3600 pb 

HindIII est à 3800 pb 

EcoR1 est à 4100 pb 

BamH1(2) est à 4600 pb 

 

donc une fois que tu sais ça et que tu vois que dans pRH on va couper aussi par BamH1 à 820 pb pour insérer le fragment alors tu as 2 possibilités, soit le fragment s'insère dans le bon sens et donc les enzymes de restriction seront placées comme ça :

 

BamH1(1) : 820 pb 

HindIII : 820 + 200 = 1020 pb (vu qu'il y a 200 pb entre BamH1 et HindIII cf 3800-3600 = 200) 

EcoR1 : 820 + 500 = 1320 pb (4100 - 3600 = 500)

BamH1(2) : 820 + 1000 = 1820 pb (4600-3600 = 1000)

 

et si au contraire le fragment s'insère dans le mauvais sens, alors tu auras 

BamH1(2) : 820 pb

EcoR1 : 820 + 500 = 1320 pb (4600-4100 = 500 pb)

HindIII : 820 + 800 = 1620 pb (4600 - 3800 = 800 pb)

BamH1(1) : 820 + 1000 = 1820 pb (4600 - 3600 = 1000 pb)

 

=> en fonction de la taille des fragments que tu obtiens, tu sauras si le fragment est inséré dans le bon ou dans le mauvais sens 

 

dis moi si ça répond à ta question 

Merci beaucoup c'est la réponse que j'attendais

j'ai réussis a reproduire les plasmides

[cassolnousmanque]

Il y a 4 heures, abdel_hdj a dit :

Merci beaucoup c'est la réponse que j'attendais

j'ai réussis a reproduire les plasmides

alors parfait !!

bon courage