Differences trangeneses et KO

[zeplusoif]

Bonjour,

Je mélange touuuuuuuttt....: les differentes transgenese et le KO.

-La trangenese additive se fait sur les cellules zygotes fécondés.

-La transgenese normal se fait sur les cellules ES.

Et le KO si j'ai bien compris se fait sur les cellules ES aussi.

Mais ensuite qu'est ce qui les differenties tous svp ?

Le Ko se fait par une recombinaison non homologue est-ce que les trangeneses aussi ?

On peut utiliser crispr/cas9 pour les trois ?

Pourriez vous me faire un petit recap de chacune svp ? je galere vraiment trop ...

 

 

[Charette]

Heeey no panic déjà !

Déjà pour réaliser une lignée d'animaux transgéniques y a 2 moyens :

- La transgénèse additive : on prend un oeuf fécondé et on injecte le matériel génétique dedans, mais le problème c'est que ce matériel va s'insérer au hasard, on va augmenter la taille du génome

- La recombinaison homologue : on a une souris qui a déjà été fécondé, on prélève des cellules de blastocytes et on injecte le matériel génétique, qui va s'insérer de façon précise.

--> La différence entre les deux, c'est que dans la recombinaison homologue on va insérer de façon précise la modification que l'on veutt obtenir : on va créer un ADNc très ressemblant à une séquence déjà existante du génome, et grâce à cette ressemblance, il va y avoir une interversion de ces deux séquences et ainsi, on va pouvoir créer un modèle avec par exemple un gène KO = inactivation du gène, soit d'autres modifications ...

 

Donc transgenèse additive et recombinaison homologue sont des technique pour obtenir une lignée transgénique.

Le KO est une modification d'un gène que l'on veut étudier, donc on créera des lignées KO d'un gène pour par exemple créer des modèle expérimentaux pour tester des médicaments, regarder l'impact d'une mutation... souvent dans le but d'une extrapolation du résultat à l'homme...

 

Crispr/Cas9 c'est un système qui va permettre d'améliorer la recombinaison homologue qui est normalement très rare.

 

N'hésite pas si tu a d'autres questions.

[zeplusoif]

Coucou @Charette, c'est deja beaucoup plus clair, merci

Du coup j'ai quelques petites question (désolé c'est vraiment flou pour moi )

-Pour les deux lignées transgénique les nouveaux genes seront-ils present dans tous l'organisme ?

-Et du coup on crée des lignés KO grace à une recombinaison homologue ? (ça expliquerait pourquoi j'avais noté que pour un KO on modifié aussi le génome au stade blastocyte)

-si la question du dessus est vraie, une lignée KO est une lignée transgenique aussi ?   (mais j'avais noté que transgénique s'exprimait dans tout l'organisme est que ko juste à certains endroit) 

 

Mercii pour tes réponses vraiment !!

 

[Charette]

Alors : 

- Transgénique = présent dans le génome et transmissible à la descendance, donc oui pour les deux techniques on a la modification qui est présente dans toutes les cellules de l'organisme

Attention cependant, dans la technique de recombinaison homologue on passe par une phase chimère avant d'avoir un animal transgénique, la on aura 2 génomes différents dans le meme individu mais sinon en finalité on obtient bien un animal avec toutes les cellules modifiées

Attention 2, on peut choisir dans la recombinaison homologue, grâce à des systèmes (Cre/Lox...) d'induire une expression de la modification que dans certaines cellules ciblées

- KO c'est bien grâce à la recombinaison homologue, et du coup ce que tu dis n'est pas fondamentalement faux, mais pas vraiment exact, en gros on aura par exemple un gène KO, et comme c'est cette modification que l'on voudra évaluer dans la lignée, on va appeler ça une lignée KO pour tel gène, mais du coup oui une lignée KO est une lignée transgénique dans laquelle on a inactivé un gène.

 

n'hésite pas a nouveau !

[zeplusoif]

Merci @Charette! 

J'ai juste deux dernieres question (promis apres j'arrete)

-Du coup pourquoi dans la lignée KO (alors que c'est une trangenese par recombinaison homologue) les descendant même apres avoir recroisé la souris chimère n'auront pas  le gene présent dans toutes les cellules ? (je pense notamment aux souris qui ont des taches blanches à certains endroit mais pas à d'autres et que je crois que langin disait que ce n'etais pas du à l'expression mais bien à la présence du gène ...)

Parceque là si j'ai bien compris enfait on considère qu'un KO c'est juste une trangenese par recombinaison homologue dans laquelle on inactive un gène? et pour les KI alors ?  

 

-petite question au passage: j'ai noté une corection d'un item qui dit: "cripr cas9" ne s'utilise que sur des zygotes et ne peut donc pas être fait sur des cellules ES" pourtant je croyais qu'on pouvait faire des KO avec crispr cas 9 ...  vous me confirmez donc que crispr ne peut se faire que pour une transgenese additive ?

 

Mercii vraiment ...

[cassolnousmanque]

salut @zeplusoif,

il y a 21 minutes, zeplusoif a dit :

Du coup pourquoi dans la lignée KO (alors que c'est une trangenese par recombinaison homologue) les descendant même apres avoir recroisé la souris chimère n'auront pas  le gene présent dans toutes les cellules ? (je pense notamment aux souris qui ont des taches blanches à certains endroit mais pas à d'autres et que je crois que langin disait que ce n'etais pas du à l'expression mais bien à la présence du gène ...)

Lors d'une transgénèse, le gène est transmis dans TOUTES les cellules du corps MAIS certaines ne vont pas exprimer le gène alors que d'autre l'exprimeront.

Pour ce qui est des taches blanches comme tu dis, c'est parce que dans ce cas là, le promoteur qui permet la transcription et la traduction du gene en charge de faire les taches blanches est un promoteur tissu spécifique, cela veut dire qu'il ne s'exprime que dans un type de tissu et pas dans les autres, par contre le gene en charge de faire les taches blanches sera quand même présent dans les autres cellules, mais si la souris est grise à cet endroit, c'est parce que le gene ne s'exprimera pas à cet endroit 

est ce que tu comprends ?  

il y a 21 minutes, zeplusoif a dit :

Parceque là si j'ai bien compris enfait on considère qu'un KO c'est juste une trangenese par recombinaison homologue dans laquelle on inactive un gène? et pour les KI alors ?

dans les KO (Knock Out) on va inactiver l'expression d'un gene, dans les KI (Knock In) on va activer l'expression d'un gene 

il y a 21 minutes, zeplusoif a dit :

pourtant je croyais qu'on pouvait faire des KO avec crispr cas 9

oui on peut faire des KO avec CRISPR Cas9

tu peux regarder cette video (elle est en anglais) 

 

Edited April 25, 2021 by cassolnousmanque