crispr/cas 9

[Pepito]

Bonjourrr,

J'ai un petit problème avec les qcm qui parle du mécanisme de crispr cas9, j'ai compris que cela servait à insérer, enlever, invalider un gêne et que c’était révolutionnaire 

Mais je ne sais pas ce qu'est le mécanisme. Est-ce qu'une ame charitable pourait m'expliquer le mécanisme svp ???

 

[cassolnousmanque]

salut @Pepito, 

alors le principe de la CRISPR-Cas9 déjà c'est issu d'un phénomène naturel qui existe chez les bactéries pour se protéger des virus.  Donc lorsque les bactéries voient la présence d'un ADN VIRAL (LE MÉCHANT ) alors elles vont produire un ARN (l'ARN guide) qui correspond à la séquence virale du virus et il va s'associer à un autre ARN et ensemble ils vont recruter la Cas9 

Quand l'ARN guide trouve sa cible dans l'ADN du virus, la Cas9 va cliver la cliver et donc l'inactiver

 

c'est le même phénomène dans la technique CRISPR Cas9 

 

après, soit la cellule répare le brin sauf que y a des erreurs => les mutations rendent les gènes inactifs => on peut identifier la fonction du gène 

soit on remplace l'ADN muté par un ADN "sain" et donc on répare le problème mais pour ça il faut avoir associé depuis le début la séquence qui va servir à réparer 

 

Voila (en gros) le principe de CRISPR 

 

j'espere que ça t'aide un minimum 

 

Bon courage

Edited April 23, 2021 by cassolnousmanque

[TACKycardie]

il y a 4 minutes, cassolnousmanque a dit :

elles vont produire un ARN (l'ARN guide) qui correspond à la séquence virale du virus

petite précision, l'ARN guide est déjà stocké dans une longue séquence comportant des ARN guides de tous les intrus avec laquelle la bactérie est déjà entrée en contact et lors d'une attaque elle n'a plus qu'à le ressortir c'est plus rapide que de devoir le produire à chaque fois, ce qui explique que cela ne marche pas lors de la première mise en contact avec l'intrus (un peu comme la première dose de vaccin qui est inefficace) mais les suivantes oui.

[cassolnousmanque]

il y a 13 minutes, TACKycardie a dit :

ce qui explique que cela ne marche pas lors de la première mise en contact avec l'intrus (un peu comme la première dose de vaccin qui est inefficace) mais les suivantes oui.

oui voila, merci, j'étais repartie depuis le début pour qu'il comprenne bien mais du coup oui c'est important de le préciser 

[TACKycardie]

il y a 1 minute, cassolnousmanque a dit :

oui voila, merci, j'étais repartie depuis le début pour qu'il comprenne bien mais du coup oui c'est important de le préciser

Oui ton explication était super claire bravo ! c'est juste un détail pour qu'il comprenne mieux mais je ne pense pas que ce soit vrmt utile pour l'exam

[Pepito]

Super merciii à tous les deux!!

Donc quand on veut faire une cas9 pour invalider un gene on doit donc transfecter un plasmide avec l'adn codant la cas9 et un signal de localisation nucéaire puis à coter un autre plasmide codant l'arn guide qui reconnaitra le gene à invalider  ? (donc un gene antisens du gene à invalider j'imagine ?)

 

Et si on veut remplacer on rajoute juste un troisieme plasmide comportant le nouveau gène ?

[Pepito]

?

 

 

[TACKycardie]

@Pepito salut, mince dsl j'avais pas vu ton deuxième message.

Je ne sais pas si la réponse que je vais t'apporter est celle que tu attends, étant donné que la technologie crispr-cas9, on l'a vue dans notre mineure sciences qui n'existe que pour les pass, en plus de l'avoir un peu abordée en génome et pharmacie.

 

Tout d'abord il existe plusieurs méthodes de transfection, j'ai vu que t'as parlé de plasmide donc je prenons l'exemple de transfection par plasmide.

Il faut savoir que les chercheurs préfèrent actuellement transfecter de manière stable uniquement l'ADN codant pour Cas9 (mais pas l'ARN guide) pour produire une lignée cellulaire exprimant Cas9. Ensuite, les ARN guides pour différentes cibles peuvent être introduits dans les cellules exprimant Cas9 par transfection transitoire. Pour cela il faut inclure une séquence de localisation nucléaire dans la séquence de Cas9 pour s'assurer qu'elle peut entrer dans le noyau pour l'édition du génome.

Donc reprenons notre plasmide, l'ADNc va être transcrit en ARNm. L'ARNm codant pour Cas9 entrera alors dans le cytoplasme pour être traduit en protéine Cas9. Le Cas9 et l'ARN guide (que l'on a ajouté par transfection provisoire comme je l'ai dit plus haut) s'unissent ensuite dans le cytoplasme pour former un RNP et retournent dans le noyau en traversant l'enveloppe nucléaire pour cibler l'ADN génomique.

 

Pour la deuxième partie de ta question, si on veut remplacer un gène et non l'invalider, on réalise une troisième transfection stable avec une séquence qui possède des homologies avec la séquence que l'on vient de cliver, c'est ce qu'on appelle communément l'ADN "moule". La cellule étant ce qui se qui se fait de plus flemmard dans le monde vivant ne va pas se casser la tête, elle va juste faire une recombinaison homologue de notre ADN moule et hop le tour est joué.

 

Voilà j'espère t'avoir éclairci un minimum, bon courage pour la suite !