agathe-dorgeville Posted April 15, 2021 Posted April 15, 2021 https://zupimages.net/viewer.php?id=21/15/s2hu.jpeg Bonjour, j’avais une question à propos de ce qcm. Les réponses justes étant B et E cependant je ne comprends pas trop pourquoi... Car pour moi si on coupe par XhoI on va enlever le terminateur et l’insert n’aura donc plus de terminateur ce qui n’est pas possible... Du coup je ne comprends pas trop pourquoi B et E sont comptées vraies... Merci de votre réponse Quote
cassolnousmanque Posted April 15, 2021 Posted April 15, 2021 (edited) coucou @agathe-dorgeville, je vais essayer de t'expliquer ça le plus clairement possible parce que ce genre de qcm tombe extrêmement souvent pour la B, si tu coupes par HindIII et Xho 1, tu commences par couper sur le fragment linéaire donc tu vois qu'on coupe avant le codon initiateur ATG (par HindIII) et après le codon terminateur TGA (par Xho1) => donc jusqu'ici pas de problème Après on veut l'insérer dans le plasmide et tu vois que tu as plusieurs sites pour Xho 1 : le premier à 570 pb et le second à 1200 pb et tu vois aussi que HindIII se trouve à 550 pb donc en coupant par Xho 1 on va être obligés de couper à 570 pb => le plasmide sera donc inséré entre HindIII (550 pb) et Xho 1 (570 pb) donc on va enlever la partie entre HindIII et Xho 1 (ce qui revient à 570-550 = 20pb qu'on va enlever et remplacer par le fragment linéaire du début) je sais pas si tu te rappelles mais lorsqu'on coupe par 2 enzymes de restriction différentes, alors on fait un clonage orienté => c'est le cas ici => B vraie pour la E, comme je t'ai dit juste au dessus, on a 2 sites pour Xho 1 (à 570 et à 1200 pb) donc si on coupe par Xho 1 on aura deux fragments : ton plasmide de départ fait 4000 pb (avant de rajouter le fragment linéaire) - de ORI jusqu'à Xho 1 (570pb) = 570 - 0 = 570 pb (vu que ORI est l'origine de réplication donc il est à 0 pb) - de Xho(1200pb) jusqu'à ORI = (4000 - 20 + la taille du fragment linéaire qui n'est pas précisée ici)- 1200 pb = c'est pas demandé ici mais c'est important de savoir le calculer si on t'avait donné la taille du plasmide donc c'est pour ça que je reviens dessus - entre les deux sites de restriction de Xho 1 = 1200-570 = 630 pb Donc on aura le premier : de ORI jusqu'à Xho 1 (570pb) + de Xho(1200pb) jusqu'à ORI = 570 + le résultat en rouge le deuxième : entre les deux sites de restriction de Xho 1 = 1200-570 = 630 pb => E vraie voila j'espère avoir pu t'aider, si jamais tu as encore des points pas clairs ou si tu as d'autres questions n'hésite pas ! bon courage pour cette dernière ligne droite ! Edited April 15, 2021 by cassolnousmanque Hypnos 1 Quote
agathe-dorgeville Posted April 15, 2021 Author Posted April 15, 2021 il y a une heure, cassolnousmanque a dit : coucou @agathe-dorgeville, je vais essayer de t'expliquer ça le plus clairement possible parce que ce genre de qcm tombe extrêmement souvent pour la B, si tu coupes par HindIII et Xho 1, tu commences par couper sur le fragment linéaire donc tu vois qu'on coupe avant le codon initiateur ATG (par HindIII) et après le codon terminateur TGA (par Xho1) => donc jusqu'ici pas de problème Après on veut l'insérer dans le plasmide et tu vois que tu as plusieurs sites pour Xho 1 : le premier à 570 pb et le second à 1200 pb et tu vois aussi que HindIII se trouve à 550 pb donc en coupant par Xho 1 on va être obligés de couper à 570 pb => le plasmide sera donc inséré entre HindIII (550 pb) et Xho 1 (570 pb) donc on va enlever la partie entre HindIII et Xho 1 (ce qui revient à 570-550 = 20pb qu'on va enlever et remplacer par le fragment linéaire du début) je sais pas si tu te rappelles mais lorsqu'on coupe par 2 enzymes de restriction différentes, alors on fait un clonage orienté => c'est le cas ici => B vraie pour la E, comme je t'ai dit juste au dessus, on a 2 sites pour Xho 1 (à 570 et à 1200 pb) donc si on coupe par Xho 1 on aura deux fragments : ton plasmide de départ fait 4000 pb (avant de rajouter le fragment linéaire) - de ORI jusqu'à Xho 1 (570pb) = 570 - 0 = 570 pb (vu que ORI est l'origine de réplication donc il est à 0 pb) - de Xho(1200pb) jusqu'à ORI = (4000 - 20 + la taille du fragment linéaire qui n'est pas précisée ici)- 1200 pb = c'est pas demandé ici mais c'est important de savoir le calculer si on t'avait donné la taille du plasmide donc c'est pour ça que je reviens dessus - entre les deux sites de restriction de Xho 1 = 1200-570 = 630 pb Donc on aura le premier : de ORI jusqu'à Xho 1 (570pb) + de Xho(1200pb) jusqu'à ORI = 570 + le résultat en rouge le deuxième : entre les deux sites de restriction de Xho 1 = 1200-570 = 630 pb => E vraie voila j'espère avoir pu t'aider, si jamais tu as encore des points pas clairs ou si tu as d'autres questions n'hésite pas ! bon courage pour cette dernière ligne droite ! Merci pour ta réponse ! Mais je ne comprends pas pourquoi on peut couper avec XhoI...., car si on l’utilise il va forcément couper à 570 et 1200pb et cela encadre le terminateur qui ne sera alors plus présent. J’ai vu dans le sujet 3 du poly de Pâques de cette année exactement le même item et celui ci avait été compté faux du fait que cela enlève le terminateur... Qcm du sujet 3 de cette année et sa correction : https://zupimages.net/up/21/15 Quote
cassolnousmanque Posted April 15, 2021 Posted April 15, 2021 (edited) je comprends pas cette correction ... pour moi il devait couper à 570pb vu que y aura complémentarité fin je vois pas pourquoi il devrait prendre le Xho1 de 1200pb qui est plus loin et donc ça veut dire qu'il prendrait que la 2e complémentarité du coup je sais pas quoi te dire désolé... essaye de demander à un de tes RM (je les connais pas en PACES) mais en vrai c'est une question hyper intéressante ça m'intrigue aussi ! et vous avez pas un post où vous pouvez discuter de ces items de recherche ? nous on en avait pour chaque UE du poly de printemps mais j'ai regardé vite fait sur le forum j'ai pas vu Edited April 15, 2021 by cassolnousmanque agathe-dorgeville 1 Quote
Solution AthosPorthosAramisDartos Posted April 16, 2021 Solution Posted April 16, 2021 Salut! Alors la digestion par Xho1 va effectivement enlever le terminateur mais l'item ne demande pas cette précision, simplement "si on insère l'ADNc par digestion enzymatique par HindIII et XhoI il s'agit d'un clonage orienté". C'est vrai, que le terminateur soit présent ou non, l'ADNc sera inséré dans un sens déterminé, orienté. Est-ce que le résultat sera fonctionnel est une autre question. Il est certain qu'il serait bien plus adapté ici d'effectuer la digestion avec les enzymes hindIII et NcoI. Maintenant pour le poly de pâque de cette année, "l'ADNc peut être inséré dans le plasmide après digestion enzymatique du vecteur et de l'ADNc par les enzyme HindIII et XhoI." C'est un peu plus compliqué. Dans l'absolu, avec le même raisonnement que précédemment cette affirmation est vraie, l'ADNc sera inséré. Mais dans le contexte du QCM, en prenant en compte l'énoncé, les chercheurs veulent faire exprimer la PI3K, alors si la question était "pour obtenir ce résultat, l'ADNc peut être inséré dans le plasmide après digestion enzymatique du vecteur et de l'ADNc par les enzyme HindIII et XhoI" devient effectivement faux. A mon sens c'est soit un errata du poly de pâque de cette année soit un manque de précision que vous ne rencontrerez pas au concours. cassolnousmanque 1 Quote
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