M18

[ZinédineZidane]

Salut, 

 

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/15/qsyp.png

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/15/i0cv.png

 

Je comprends pas pq la 2C est vraie, pour moi vu qu'on à une bande à 800 avec Hind3 c'est qu'on est pas dans le bon sens. L'insertion de l'ADNc est juste après le site Hind3 du 2ème plasmide, donc en cas de bonne insertion on est à 300 non ?

[cassolnousmanque]

salut @ZinédineZidane,

je vais essayer de t'expliquer ça 

 

On a dit dans l'énoncé que le clonage se faisait par BamH1

Donc dans le pBetaglobine  on coupe à 4600 et à 3600 => 4600 - 3600 = 1000 pb 

et on injecte ce fragment dans le plasmide pRH qu'on va aussi couper au niveau de BAMH1 donc à 820 pb => 4500 + 1000 = 5500 pb au total pour ce plasmide 

 

jusque là est ce que ça va ?

 

si tu as bien compris ça, alors après si on coupe pRH par Hind3 on va le couper à 810 pb et si tu regardes la figure 3 tu vois un trait entre 500 et 1000 pb donc ça correspond au premier fragment de 810 pb 

 

et donc le deuxième fragment fera 5500 - 810 = 4690 pb => tu regardes la figure 3 et tu vois un fragment à un peu moins de 5000 pb donc c'est bon ! 

 

voilà, j'espère avoir pu t'aider

si tu as d'autres question n'hésites pas à me les poser et bon courage pour cette dernière ligne droite

[ZinédineZidane]

Oui mais on va couper le site Hind3 qui était présent sur le plasmide pRH de base, ainsi que le site de l'ADNc que l'on a rajouté (situé à 200pb de la séquence ATG). Donc si je coupe un plasmide orienté j'ai un fragment de 210pb, et un non orienté (ATG proche du terminateur) un fragment de 800pb.

 

Ce que je comprends pas c'est ça pour moi piste 1 et 2 -> bande à 200 donc bien orienté

piste 4 -> mauvais sens, donc pas de transcription possible.

[cassolnousmanque]

je vais regarder, mais si tu veux une réponse plus rapide n'hésite pas à identifier tes RM (parce que ceux de PACES je les connais pas)

 

edit: alors effectivement si tu as le plasmide dans le bon sens tu auras un fragment de 210 et un autre de 5500-210 = 5290 pb

et si tu as un plasmide dans l'autre sens, tu auras un fragment de 810 et un autre de 5500-810 = 4690 pb

 

donc tu as raison, la transcription ne pourra pas se faire si on prend Hind3 puisque il est dans l'autre sens 

mais pour les deux autre c'est bon 

 

désole j'avais pas fait attention à ça 

 

 

Edited April 15, 2021 by cassolnousmanque

[AthosPorthosAramisDartos]

Saloute,

Oui je suis d'accord, la digestion par Hind3 révélant un fragment autour de 800 pb montre que l'insertion ne s'est pas faite dans le bon sens. Cependant, le promoteur est là, la séquence d'ADNc aussi, donc la transcription est donc tout à fait possible, mais elle ne donnera eeffectivement pas du tout la protéine de Bglobine que nous attendons.

[cassolnousmanque]

du coup si c'est bon pour toi est ce que tu peux passer le sujet en résolu ?

[ZinédineZidane]

Merci à vous deux ! J'ai pas été attentif y'a transcription c'est vrai