Ancien Responsable Matière choLOLApine Posted April 1, 2021 Ancien Responsable Matière Posted April 1, 2021 bonsoiiir, je me rends compte que j'ai pas bien compris le principe des méthodes corrigez moi si je dis des conneries mais en gros pour faire une coimmunoprécipitation on commence par faire une immunoprécipitation avec un Ac dirigé contre une protéine A d'intérêt, on lave et ensuite on révèle avec un Ac dirigé contre une autre protéine B et si y'a révélation c'est que les protéines A et B interagissent? et du coup j'ai un qcm là dessus que j'arrive pas à comprendre si qq peut m'aider à interpréter les résultats de l'énoncé svp Révélation Révélation réponses vraies : AC et du coup là qu'on y est, si on peut me faire un piti topo sur la méthode du pull down aussi ce serait trop cool merci d'avance Quote
Solution OxyGenS Posted April 1, 2021 Solution Posted April 1, 2021 Coucouuu Peut-être que ce sujet pourra peut-être t'aider : Tu as 2 analyses : le WB qui résulte de l'IP (figure 2) et un WB sur les extraits protéiques totaux (figure 1). La figure 1 sert à savoir quelles protéines sont présentes dans l'extrait. La figure 2 permet de connaître les interactions. B : faux, on voit sur la figure 1 qu'on a une bande à 20kDa en présence de M D : faux, on voit sur la figure 2 qu'en présence de M on n'a pas de bande pour FT --> avec M, FT n'interagit pas avec p53. E : faux, idem que pour le B on voit bien qu'avec M on a tjs FT dans notre extrait donc FT n'est pas dégradée C'est plus clair ? Quote
Ancien Responsable Matière choLOLApine Posted April 1, 2021 Author Ancien Responsable Matière Posted April 1, 2021 (edited) il y a 21 minutes, OxyGenS a dit : Peut-être que ce sujet pourra peut-être t'aider : ça m'éclaire déjà pas mal, dernière petite question dans le cours de clara elle a écrit "la grosse différence c'est qu'en IP l'interaction est déjà présente alors qu'en pull down on force le contact" je comprends pas trop le sens de la phrase il y a 21 minutes, OxyGenS a dit : le WB qui résulte de l'IP (figure 2) et un WB sur les extraits protéiques totaux (figure 1). La figure 1 sert à savoir quelles protéines sont présentes dans l'extrait. La figure 2 permet de connaître les interactions. B : faux, on voit sur la figure 1 qu'on a une bande à 20kDa en présence de M D : faux, on voit sur la figure 2 qu'en présence de M on n'a pas de bande pour FT --> avec M, FT n'interagit pas avec p53. E : faux, idem que pour le B on voit bien qu'avec M on a tjs FT dans notre extrait donc FT n'est pas dégradée juste pour être sure d'avoir bien compris, sur la figure 2 on a pris un Ac dirigé vers p53, ensuite on a lavé puis après on a fait un WB pour voir quels protéines il reste? on voit qu'en absence de M il reste FT ça veut dire qu'elle interagit avec p53 et en présence de M on a plus de FT donc M bloque l'interaction avec p53? Edited April 1, 2021 by choLOLApine Quote
OxyGenS Posted April 1, 2021 Posted April 1, 2021 Je vais te dire comment je le comprends : Disons qu'on veut vérifier que les protéines A et B interagissent ensemble. En IP : tu vas avoir ton Ac anti-A (ou B mais prenons anti-A ici) lié à la bille. Cet Ac va reconnaître la protéine A. Si A et B interagissent ensemble A et B vont précipiter en même tps via cette bille couplée à l'Ac anti-A. En Pull down : sur ta bille tu vas mettre directement ta protéine A (= appât) et en gros tu vas aller à la pêche à la protéine B. (Bien évidemment tu peux avoir B comme appât mais tu as compris le principe, il fallait bien choisir pour l'exemple) Si ce n'est pas ça, je ne vois pas trop ce qu'elle a voulu dire Quote
Ancien Responsable Matière choLOLApine Posted April 1, 2021 Author Ancien Responsable Matière Posted April 1, 2021 il y a 12 minutes, OxyGenS a dit : Je vais te dire comment je le comprends : Disons qu'on veut vérifier que les protéines A et B interagissent ensemble. En IP : tu vas avoir ton Ac anti-A (ou B mais prenons anti-A ici) lié à la bille. Cet Ac va reconnaître la protéine A. Si A et B interagissent ensemble A et B vont précipiter en même tps via cette bille couplée à l'Ac anti-A. En Pull down : sur ta bille tu vas mettre directement ta protéine A (= appât) et en gros tu vas aller à la pêche à la protéine B. oook merci beaucoup t'es une boss, tu peux juste confirmer ce que j'ai écrit au dessus pour le qcm? Quote
OxyGenS Posted April 1, 2021 Posted April 1, 2021 (edited) Pardon j'avais pas vu il y a 35 minutes, choLOLApine a dit : sur la figure 2 on a pris un Ac dirigé vers p53 Oui pour ton IP tu prends un Ac anti-p53 c'est écrit dans l'énoncé mais ça se déduit de la figure sinon. il y a 35 minutes, choLOLApine a dit : ensuite on a lavé puis après on a fait un WB pour voir quels protéines il reste? Je t'avoue qu'entre le moment où le complexe bille-Ac-protéine(s) précipite et le moment où on fait notre WB je sais pas exactement comment ça se passe mais on s'en fiche pas besoin de le savoir. Comme tu le dis, après ton IP tu fais un WB avec les "produits" de ton IP (j'appelle "produits" le contenu en protéines qui a précipité). Quand tu fais ton WB par contre tu prends des Ac dirigés contre toutes les protéines que tu étudies, ici FT et p53. il y a 35 minutes, choLOLApine a dit : on voit qu'en absence de M il reste FT ça veut dire qu'elle interagit avec p53 et en présence de M on a plus de FT donc M bloque l'interaction avec p53? Exact Edited April 1, 2021 by OxyGenS choLOLApine 1 Quote
Ancien Responsable Matière choLOLApine Posted April 2, 2021 Author Ancien Responsable Matière Posted April 2, 2021 perfecto merci beaucoup bg OxyGenS 1 Quote
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