Pull down vs IP

[OxyGenS]

Bonsoir,

 

J'aimerais m'assurer d'avoir bien compris la différence entre ces 2 méthodes.

Exemple : on veut voir si la protéine A interagit avec la protéine B.

 

• Pour le pull down, on va avoir appât = protéine A, elle est liée à la bille.

Puis on fait un WB et on regarde si au niv de l'Ac anti-B on obtient une bande.

 

• Pour l'IP, on a un Ac anti-A (cet Ac est reconnu par son fragment Fc par un Ac lié à la bille) qui reconnaît la protéine A.

Puis on fait un WB et on regarde si au niv de l'Ac anti-B on obtient une bande.

 

C'est correct ?

Merci

[Nezuko]

Bonsoiir

 

il y a une heure, OxyGenS a dit :

• Pour le pull down, on va avoir appât = protéine A, elle est liée à la bille.

Puis on fait un WB et on regarde si au niv de l'Ac anti-B on obtient une bande.

C'est juste, j'ajouterais simplement qu'il faut faire une centrifugation pour pouvoir récupérer les complexes avec les billes dans le culot + on fait un SDS avec le WB (on regarde aussi si on a la protéine A, même si logiquement on la trouve toujours vu qu'elle est liée à la bille)

 

il y a une heure, OxyGenS a dit :

• Pour l'IP, on a un Ac anti-A (cet Ac est reconnu par son fragment Fc par un Ac lié à la bille) qui reconnaît la protéine A.

Puis on fait un WB et on regarde si au niv de l'Ac anti-B on obtient une bande.

Alors ici il me semble pas qu'il y ait un anticorps qui reconnaisse l'anticorps anti-A sur la bille, mais plutôt que la bille reconnait directement cet anticorps. Ensuite comme pour le pull-down, centrifugation puis SDS avec le WB et on regarde si on a bien les protéines A et B pour prouver une interaction entre les deux (le but de ces technique étant de trouver les partenaires protéiques)

 

J'espère que c'est assez clair 

[OxyGenS]

Il y a 13 heures, Nezuko a dit :

Alors ici il me semble pas qu'il y ait un anticorps qui reconnaisse l'anticorps anti-A sur la bille, mais plutôt que la bille reconnait directement cet anticorps.

Oui en effet dsl je crois que j'ai mal interprété une explication de la chargée de TD

Mais comment une bille peut reconnaître un Ac spécifiquement par le fragment Fc ? Il faut bien un élément particulier le permettant non ?

[Nezuko]

Je pense très sincèrement que ce détail est hp car dans le cours la prof dit seulement qu'on ajoute des billes qui reconnaissent l'anticorps

Du coup la réponse ne se trouve pas dans le cours, et en cherchant sur internet (wikipédia, le mieux serait quand même de demander à un prof si tu souhaite vraiment savoir haha) : "Les anticorps spécifiques d'une certaine protéine, ou d'un groupe de protéines, sont ajoutés directement au mélange de protéines. Les anticorps n'ont pas encore été attachés à un support en phase solide et restent donc libres de flotter dans le mélange de protéines pour aller se fixer sur leurs « cibles ». Au fur et à mesure, on ajoute les billes enrobées de protéines A/G au mélange d'anticorps et de protéines. À ce stade, les anticorps qui sont maintenant liés aux protéines qui leur correspondent vont s'agglutiner sur les billes."

La reconnaissance se ferait donc par le biais de protéines et non d'autres ac

[OxyGenS]

D'accord merci