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techniques et tampon de lyse


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Salut, il y a un item d'annale (de l'an dernier à Maraich) qui me pose pb :

"la congélation d'un culot de bactéries exprimant la protéine COV2 dans un tampon de lyse permet d'obtenir un homogénat contenant la protéine COV2"

Ici je ne vois pas du tout comment il faut raisonner pour répondre, j'ai bien compris qu'après un tampon de lyse on a soit un homogénat, soit un extrait brut mais comment savoir ce que l'on va obtenir entre ces deux ? Et pourquoi une congélation du tampon de lyse et pas un chauffage ? J'ai cherché dans le cours mais je vois pas d'info qui me fait avancer ...

Posted

Ensuite toujours dans la même annale, il y a l'item A de ce QCM qui le pose pb car je ne vois pas pourquoi on en met 2, ca aurait pu marcher avec 1 seul ARN guide non ?

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/12/rxiq.png

 

Concernant la cytofluorométrie, elle permet de quantifier non?

Parce que dans un QCM, l’item " cette expérience permet de quantifier la sécrétion d’IFN dans le milieu de culture"  est compté faux…

  • Solution
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Re coucou !

Il y a 3 heures, MaeDu a dit :

"la congélation d'un culot de bactéries exprimant la protéine COV2 dans un tampon de lyse permet d'obtenir un homogénat contenant la protéine COV2"

En fait c'est faux de dire qu'après un tampon de lyse on a soit un homogénat, soit un extrait brut. Après une lyse, on a un homogénat PUIS après centrifugation ou filtration de cet homogénat, on a l'extrait brut. 

On fait le tampon de lyse à 4°c pour conserver la protéine sous forme soluble et native donc en la congélant, ça fait pareil. Il ne faut par contre pas chauffer sinon ça dénaturerait notre protéine COV2. 

En soit cet item est vrai puisque c'est la définition du tampon de lyse. On travaille à froid à partir d'un culot, on fait un tampon de lyse et on obtient un homogénat.

 

Il y a 2 heures, MaeDu a dit :

ca aurait pu marcher avec 1 seul ARN guide non ?

Dans cette expérience, on fait un KO puisqu'on ne veut plus le gène de la myostatine. Pour inhiber complètement le gène, il faut faire le KO sur les deux allèles donc il faut deux ARNs guides

 

Il y a 2 heures, MaeDu a dit :

Parce que dans un QCM, l’item " cette expérience permet de quantifier la sécrétion d’IFN dans le milieu de culture"  est compté faux…

D'où vient ce QCM ?

Posted

re coucou @colinergique 😄

 

Il y a 1 heure, colinergique a dit :

Après une lyse, on a un homogénat PUIS après centrifugation ou filtration de cet homogénat, on a l'extrait brut. 

Oui j'ai oublié de dire mais l'item était bien vrai, donc si l'item aurait été " la congélation d'un culot de bactéries exprimant la protéine COV2 dans un tampon de lyse permet d'obtenir un homogénat un extrait brut contenant la protéine COV2 " ca aurait été faux puisqu'on fait d'abord homogénat puis centrifugation --> extrait brut c'est bien ça?

 

Il y a 1 heure, colinergique a dit :

D'où vient ce QCM ?

Une annale de Maraichers, je te mets le lien ici du QCM, il s'agit de l'item A (j'ai re vérifié, il est bien compté faux) : https://zupimages.net/viewer.php?id=21/12/tcdl.png

Posted
Il y a 5 heures, MaeDu a dit :

si l'item aurait été " la congélation d'un culot de bactéries exprimant la protéine COV2 dans un tampon de lyse permet d'obtenir un homogénat un extrait brut contenant la protéine COV2 " ca aurait été faux puisqu'on fait d'abord homogénat puis centrifugation --> extrait brut c'est bien ça?

Exactement !

 

 

Il y a 5 heures, MaeDu a dit :

Une annale de Maraichers, je te mets le lien ici du QCM, il s'agit de l'item A (j'ai re vérifié, il est bien compté faux) : https://zupimages.net/viewer.php?id=21/12/tcdl.png

Aaaaah oui je me rappelle de cet item. J'ai déjà répondu à cette question sur ce post que je te mets en dessous. Du coup je te laisse lire mon explication et si tu comprends pas un truc, n'hésite pas à poser la question, je te réexpliquerai différemment.

 

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