qcm pas compris

[Inconnu_2023]

bonjouuur, je sais que ce que jdemande est bcp et jcomprend qu'on refuse mais je tente comme mm :

 

est ce qu'une bonne ame pr m'expliquer TOUT le qcm en question de maniere detailler et particulierement la question C en priorite ?

je comprend pas comment repondre et la correction m'aide pas olus que ca :/ (genre je vois pas ici ou est ce qu'on voit que c'est un clonage orienter parce que je vois qu'elle enzyme il faut regarder NOt1 et NOT2 ? ou bien BAM H1 ? , je vois pas du tt comment repondre a la question C, j'ai pas compris la B,etc...)

 

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/11/yezt.png 

 

merci d'avance <3 !!

[Vaiana]

@Inconnu_au_boulot

 

Salut, alors moi j'suis chaud pour t'aider  

 

Je te re-contextualise un peu tout ça. Donc tu as deux plasmides, celui de gauche que l'on nomme pProm et celui de droite plasminine. Alors, on va prendre pProm et on va découper un morceau entre les deux enzymes nommées Bamh1. Dans ce morceau tu as un promoteur. Tu vas ensuite, découper le plasmide de droite au niveau de bamH1. Donc tu auras une seule coupure ici puisque tu as qu'un seul bamH1 contrairement à gauche. Bref, donc tu prends le fameux morceau qui provient du plasmide de gauche et tu l'insères au niveau de ta seule coupure dans le plasmide de droite -> on obtient un plasmide recombinant. 

 

Donc 

A) Si on utilise un seul type d'enzyme -> non orienté, deux types -> orienté 

B) Ici pour savoir si un promoteur a été inséré dans le bon, il faut regarder la position de l'enzyme "PST1" au niveau du promoteur. En gros, il vaut déjà que ton enzyme soit au niveau du promoteur et PAS AU MILIEU.  Ici j'ai l'impression qu'elle n'est pas dessus.

C) Pour ce type d'item, il faut que t'imagines ton plasmide recombinant dont je te parlais plus haut... Et que tu surlignes tous les endroits où tu as cette fameuse enzyme HindIII puis tu comptes les morceaux que cela donne 

D) Moi en sah ici j'aurai mis non parce que ça coupe à deux endroits différents, puisque HindIII est présente à deux endroits, je pense que pour le plasmide qui reçoit vaut mieux que ça compte à un seul endroit  

E) Pour ce type d'item attention le professeur piège beaucoup !! Il faut bien que tu vois si Adnc codant la résistance est sur ton plasmide recombinant que tu as imaginé. 

C'est-à-dire ? Il faut que cette ADNc soit sur le plasmide qui reçoit le morceau et pas celui qui donne. le morceau.

Regarde dans ton plasmide de droite, c'est-à-dire celui qui reçoit le morceau tu as bien, un adnc codant une résistance.

 

Bref, en tout cas dis moi les bonnes réponses j'ajusterai ma réponse en fonction.

Tu me dis si c'est clair, je peux encore t'aider stv  

[ysoleucine]

Pro tip de xX_DarkSasuke_Xx : surligne tous les BamH1 et dessine en ligne ce que ça te donne comme morceaux pour chaque plasmide.

 

1ere étape: digérer Pprom avec BamH1: on a 2 fois BamH1 en position 800 et 1600, et ton plasmide fait 3200 pb. Du coup quand tu coupes au niveau des BamH1 tu as 2 fragments: celui qui est entre les positions 800 et 1600 fait 800pb et l'autre fait 3200 - 800 = 2400 : 

 ₈₀₀ ____________________ _{1600                    1600} _______________________________________________ 800

                 800pb                                                                                          2400pb

 

Voilà Pprom digéré

 

2ème étape: digérer plaminine avec BamH1: il n'y en a qu'un donc tu te retrouves avec un seul fragment de la taille de ton plasmide = 5200pb

 

₁₃₀₀ _________________________________________________________________________________________________________ ₁₃₀₀

                                                                                               5200pb

Hop ! plaminine digéré par BamH1

 

3ème étape: mettre ton fragment orange dans Plaminine ouvert (parce que le promoteur en question est dans le fragment orange, le bleu c'est poubelle mtn)

Sauf que la on maitrise pas vraiment c'est à dire que on met les fragments oranges et rouges dans le même tube, avec leur ligase et comme on a des extrémités coupées par BamH1 d'un côté comme de l'autre, ils s'accrochent un peu dans le sens qu'ils veulent. Les BamH1 attrappent les autres BamH1 et on finit souvent avec des fragments qui se sont insérés dans le mauvais sens et qui peuvent pas traduire (ATG est pas au bon endroit) C'est pour ca qu'on dit que c'est non orienté.

 

Du coup, tu obtiens un vecteur de 5200 + 800 = 6000pb 

 

 

 

 

 

Bon bref ca c'est ma méthode de base au vu de l'énoncé mais conseil: prend des feutres le jours du CC et dessine les fragments. C'est des exercices d'additions et de soustraction, si on l'image un peu ca roule tout seul tkt

il y a 6 minutes, tRARAbajar a dit :

D) Moi en sah ici j'aurai mis non parce que ça coupe à deux endroits différents, puisque HindIII est présente à deux endroits, je pense que pour le plasmide qui reçoit vaut mieux que ça compte à un seul endroit

En plus si tu regardes le promoteur qui t'intéresses Hind III coupe en plein milieu, c'est moyen

[Inconnu_2023]

alooors deja merciiii bcp pr vos reponses j'ai juste encore un blocage : 

 

B°) @tRARAbajar quand tu parle pr la B on est daccord que tu parle pr le plasmide de droite ? parce qu'ils disent le plasmide recombinant hein ? (je demande parce que le "j'ai l'impression qu'il est un peu au dessus m'ad foutus le doute mdrr il est au dessus sur les deux )

 

et merciiiii a vous deux pr vos super reponses   

 

 

 

[Vaiana]

il y a 2 minutes, Inconnu_au_boulot a dit :

B°) @tRARAbajar quand tu parle pr la B on est daccord que tu parle pr le plasmide de droite ? parce qu'ils disent le plasmide recombinant hein ? (je demande parce que le "j'ai l'impression qu'il est un peu au dessus m'ad foutus le doute mdrr il est au dessus sur les deux )

 

Plasmide recombinant = morceau entre les enzymes Bamh1 de celui de gauche qui contient le promoteur  dont on parle dans l'item B + plasmide de droite où tu as une seule coupure et où tu inséreras ce morceau contenant le promoteur justement.

 

En gros ici comme je te disais tu extraies le promoteur sur celui de gauche donc si tu veux tester l'orientation de ton promoteur tu regarderas celui de gauche puisque c'est là d'où il vient 

Edited March 21, 2021 by tRARAbajar

[Inconnu_2023]

aaaah daaaaccord ok ^^ merciii bcp  !! 

 

(je mets rara e resolus mais si tu veux que jte mette toi hesite pas hein mdrrr @révis_ew zavez grave bien repondu tt les deux !) 

[ysoleucine]

Il y a 2 heures, Inconnu_au_boulot a dit :

aaaah daaaaccord ok ^^ merciii bcp  !! 

 

(je mets rara e resolus mais si tu veux que jte mette toi hesite pas hein mdrrr @révis_ew zavez grave bien repondu tt les deux !) 

tkt tkt je m'en fiche de mon compteur de résolus je voulais juste t'aider bb