QCM 3 sujet type 3 du poly Printemps

[microtubulou]

Salut! j'aurais besoin de précisions sur la correction de cet exo; https://zupimages.net/viewer.php?id=21/11/7tui.png

En fait je en comprend pas comment fonctionne l'expérience, je ne comprend pas très bien le GST Pull Down je crois; je ne comprend pas non plus pourquoi K n'interagit pas avec le GST, étant donné qu'on voit bien 3 bandes dans l'extrait... En fait tout l'exercice est assez confus pour moi. Merci d'avance!  

[colinergique]

Saluut ! 

J'ai répondu à une question sur la technique Pull Down juste ici : 

Dans cette expérience de Pull Down, on a 3 constructions réalisées :

• une avec l'étiquette GST seule : contrôle 
• une avec la protéine X + étiquette GST
• une avec la partie C-terminale de l'AA 1 à 25 de la protéine X + étiquette GST

L'étiquette GST est utile ici car elle va être facilement reconnue par les billes qui portent du Glutathion (cf cours : Glutathion a de l'affinité pour GST et se fixe dessus)

-> item E) : vrai

 

Si on regarde les résultats du WB :

dans le rectangle du haut, on voit qu'après GST-Pull Down, quand on met un Ac anti-protéine K, on a une bande qu'au niveau de GST-X. Ca veut dire que lorsqu'on a mis la construction GST-X en présence d'un Ac qui reconnait la protéine K, on remarque la présence de la protéine K. C'est parce que cette protéine a interagit avec le complexe GST-X.

Seulement pour savoir si elle a interagit avec GST ou la protéine X, on doit regarder si on a une bande au niveau de la construction GST (tout en haut à gauche). Il n'y a pas de bande. Ca veut dire qu'on a pas détecté de protéine K et qu'il n'y a pas d'interaction entre la protéine K et GST.

-> K interagit donc avec X

 

A) Vrai

B) Faux

 

Dans le deuxième rectangle (du milieu), on analyse cette fois la présence de GST après la technique de GST Pull Down grâce à un Ac anti-GST. En fait c'est un contrôle pour s'assurer que l'étiquette GST est bien présente et qu'elle ne s'est pas détachée ou n'importe quoi d'autre.

 

Le troisième rectangle est également un contrôle pour s'assurer cette fois que la protéine K est bien présente, qu'elle soit liée ou pas.

 

En gros, pour pouvoir répondre aux items tu regardes et interprètes le rectangle du haut à propos du WB anti-K.

 

Est ce que c'est plus clair ? Je t'avoue que c'est compliqué d'expliquer des résultats d'analyse par écrit 

Si tu comprends pas un truc n'hésites pas, j'essaierai de reformuler. Et sinon bon courage !! 

[microtubulou]

Merci @colinergique c'est bcp plus clair !! Mais par contre je ne comprend toujours pas pourquoi il y a trois bandes dans le rectangle du bas ? En fait pour moi ca veut dire que l'anticorps anti K reconnait aussi GST tout seul, du coup j'imagine qu'il y a qqch dans la présentation des résultats que je ne comprend pas... Est ce qu'il y a trois bandes parce que c'est le WB de l'extrait, donc il n'y a pas les constructions GST, GST-X et GST-X(1-25), et donc les places des bandes (le fait qu'elles soient sous GST, GST-X etc) n'ont pas d'importance ? 

[colinergique]

Il y a 1 heure, lou3008 a dit :

Est ce qu'il y a trois bandes parce que c'est le WB de l'extrait, donc il n'y a pas les constructions GST, GST-X et GST-X(1-25), et donc les places des bandes (le fait qu'elles soient sous GST, GST-X etc) n'ont pas d'importance ? 

Oui c'est quasiment ça. En gros l'extrait protéique c'est là où il y a les protéines K donc dans les 3 cas, on va repérer la présence de cette protéine en WB. Attention ici on a pas fait de Pull Down donc il est pas question d'une quelconque interaction.  

De toute façon c'est un contrôle donc le but est d'avoir les 3 bandes. Si on a pas les 3 bandes, les résultats sont ininterprétables et on doit refaire les expériences.

[microtubulou]

Ok parfait, merci vraiment !