Immuno

[OxyGenS]

Bonjour !

 

1) "A propos de l'immunofixation et de l'immuno-empreinte (par exemple : western blot -PAGE-SDS) : les 2 techniques utilisent une immunodétection par anticorps marqués" --> FAUX : "L’immuno-fixation utilise un colorant comme le Bleu de Coomassie".

 

Ici, l'immunofixation utilise des Ac mais du coup les bandes qu'on voit ne sont pas dues aux Ac.

Du coup comment ça se passe ?

Si je comprends bien, on prend plusieurs bandes sur lesquelles on obtient toutes les protéines sériques révélées à l'aide de bleu de coomassie (cf à gauche) puis on ajoute des Ac (non marqués) et après jsp comment les protéines non spécifiques sont enlevées...

Mais je comprends pas comment on passe de bleu à marron/orangé haha

 

2) "Concernant la technique d'immunodosage des cytokines humaines par cytométrie en flux : Après prélèvement d'organe et broyage tissulaire dans un milieu de culture, elle permet de doser plusieurs cytokines à partir d'une même aliquote de la phase hydrosoluble obtenue." --> VRAI.

Lorsqu'on fait un broyage tissulaire ça ne risque pas de lyser des cellules ?

Etant donné qu'un immunodosage de cytokines révèle les cytokines sécrétées, si jamais on lyse les cellules cela pourrait fausser les résultats non ?

 

3) "Concernant la technique des hybridomes (hybridation somatique) : Elle permet uniquement de préparer des cellules sécrétrices d'anticorps" --> FAUX.

Car elle permet de préparer des LB (or ce sont les plasmocytes qui sécrètent les Ac) ?

 

4) Items faux, je voudrais bien la justification svp

"Les hybridomes expriment l'ensemble des gènes apportés par la fusion des 2 partenaires cellulaires"
"Tous les hybridomes sont sécrétants"

 

5) Vrais : BDE

On peut me réexpliquer BCDE svp ?

 

Merci

[Magipark]

1) on n’utilise pas que du bleu de Coomassie, d'où la couleur jaune (je ne connais pas forcément le colorant)

2) Si on risque une atteinte des cellules, mais je ne pense pas que l'on s'en soucis dans cet item vu qu’on veut juste tester la présence de cytokines (pas forcément en extra cellulaire)  et donc on veut juste les faire sortir des cellules.

3) les hybridomes permettent la production d'Ac.

4)Si on exprime tout l'hybridome n'a plus d'intérêt vu qu'on veut prendre la partie HPGRT+ et sécréteur d'un côté et cultivable en HAT de l'autre. Pour le deuxième item, je pense que c'est faux parce que c'est pas parce qu’on a formé l'hybridome qu'il va être sécrétant, il faut qu'il ait pris les bonnes caractéristiques des deux, d'où la phase de sélection des hybridomes.

5) les anticorps produit par l'hybridome doivent être capable de se lier au alpha 1 (logique c'est l'objectif) et au IgG1 normal humaine pour pouvoir former des chaines.

Elles devront se lier au paratope car si elles se lient aux allotypes on a une liaison avec un marqueur qui ne se différencient pas au sein de l'individue alors que l'idiotype lui est différent d'un type d'ac à l'autre. Cela permet d'être donc plus précis dans les liaisons. 

pour le dernier item, "après culture en milieu HAT" --> permet sélection des hybridomes, "peut se lier à alpha 1" --> ils sont produit pour ça, "mais aussi à une IgG1 de paratope différent" --> comme pour les autres items, l'allotype sera constant donc les IgG peuvent se lier entre elles et former des chaines.

 

J'espère avoir été suffisamment clair dans ma réponse! Bonne chance.

[OxyGenS]

Merci pour ta réponse !

 

1) Est-ce que tu saurais m'expliquer les étapes en partant du sérum pour arriver à notre bande avec par ex un Ac anti-IgG ?

 

2) Mais quand on dose les cytokines ce n'est pas seulement pour celles sécrétées ?

Sinon tu pourrais m'indiquer quand est-ce qu'on dose les cytokines intra-cellulaires ?

 

5) Je reprends ce QCM à tête reposée demain il est un peu tard je n'ai plus toute ma tête haha

Edited March 19, 2021 by OxyGenS

[Magipark]

1) 1.on a notre extrait protéique ( sérum) qu'on fait migrer sur un Colonne et on voit qu'il y a plusieurs type de protéine.

2. On prend ce même extrait on le même sur une Colonne avec des anti corps anti IgG qui fixeront les IgG et on révèle la Colonne avec un colorant.

 

2) à mon avis c'est juste en fonction du QCM mais c'est vrai que la c'est ambigu je ne pense pas qu'on puisse dire "d'oser" Mais j'aurais plus dit révéler vu ce que je comprend de l'item. Sinon oui on dose les citokynes dans le milieu extra cellulaire.

 

Bon courage !

[OxyGenS]

1) Et du coup les anti-IgG précipitent j'imagine, mais comment on enlève les autres qui Ig qui sont initialement sur la bande mais qui ne seront pas reconnues par les anti-IgG ?

A moins qu'ils y restent mais le colorant se fixe spécifiquement sur les Ac anti-prot°, anti-IgG, anti-IgM, etc ?

 

5) J'ai du mal à comprendre pq on veut que l'Ac sécrété par l'hybridome se lie aux IgG1 et en quoi les chaînes sont importantes

[Magipark]

1) tu les fais descendre l'extrait protéique sur la colonne et il n'y aura que les IgG qui seront fixé si on a des ac anti IgG (ils vont se fixer spécifiquement aux IgG) et donnc les autres protéines seront élué et sortiront de la colonne car elles n'auront pas été fixé.

 

5) c'est le principe des ac: tu veux que 1: ils se lient à l'ag cible et 2 qu'ils se lient à d'autre ac pour former un paquet d'ac lié avec des ag ce qui rendra plus facile leur détection par les macrophages ou autre cellules de l'immunité qui deviendront présentatrice d'antigène. Les chaines d'ac permettent donc de faire des paquets aggloméré d'anticrops liés à des antigènes. 

[OxyGenS]

Merci !