pacesornotpaces Posted March 15, 2021 Posted March 15, 2021 Bonjour! Alors je crois que je suis un peu perdue par rapport à comment se déroule la recombinaison homologue. Déjà, est ce qu'elle affecte les cellules germinales ou seulement les cellules somatiques ? Il y a la recombinaison homologue "normale" sur les cellules Es et celle fait grâce à Cas 9 sur le zygote directement non? Sauf que avec cas9 on réussit directement dans le cas du Ki à obtenir l'inactivation double du gène non et ainsi ne pas avoir de cellules chimériques non? Un grand merci à celui qui pourra m'aider un peu Quote
Solution Eme- Posted March 15, 2021 Solution Posted March 15, 2021 Salut @pacesornotpaces! Lors de la recombinaison homologue "normale" on transfecte des cellules ES (cellule embryonnaire au stade blastocyste), on va ensuite les sélectionner avec des antibiotiques pour éliminer celles qui n'auront pas été transfectées avec la néomycine (par exemple), et une sélection de l'activité thymidine kinase en faisant pousser les cellules avec du ganciclovir. Ensuite elles vont être injectées dans un blastocyste d'une souris pseudo-gestante donc la souris qui va naitre sera chimérique. Pour CRISPR/Cas9, pour le modèle KI, on injecte la Cas9, un ARN guide, et un ADN donneur sur un zygote, donc tout son génome sera modifié et on n'aura pas de souris chimérique. Juste en Ki ça sera plutôt un ajout d'un gène (donc d'une fonction), et c'est en KO que l'on va inactiver les deux allèles (attention on fera de recombinaison non homologue). C'est plus clair ? Quote
pacesornotpaces Posted March 15, 2021 Author Posted March 15, 2021 Oui merci beaucoup pour ta réponse @Eme-! Eme- 1 Quote
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