lorinne Posted March 9, 2021 Posted March 9, 2021 hey *on est d'accord que l'épitope T a besoin d'être dégradé et présenté par le CMH d'une CPA alors que l"épitope B nn ? *pourquoi on ne considère pas que la technique de pull down est une technique d'immunoprécipitation ? *par rapport à l'immunolyse dépendante du complément pourquoi dit-on qu'elle repose sur le mecanismes de lyse des cellules prealablement recouvertes d'ac par le complement ? *comment la sequence peptidique de l'antigene constituant l'épitope B peut etre cartographié par dot-blot ? *j'ai pas compris la différence entre dot-blot et western blot ? *on est d'accord que dans la méthode d'ELISA on ne denature pas, nn? *pourquoi la technique d'ELISA nécessite que les anticorps anti-protA soient dirigés contre des épitopes differents ? MERCI Quote
EmmaFerjani Posted March 9, 2021 Posted March 9, 2021 Hello! il y a une heure, lorinne a dit : *on est d'accord que l'épitope T a besoin d'être dégradé et présenté par le CMH d'une CPA alors que l"épitope B nn ? Yes! d'où les termes Epitope T séquentiel et Epitope B conformationnel il y a une heure, lorinne a dit : *pourquoi on ne considère pas que la technique de pull down est une technique d'immunoprécipitation ? Est-ce que tu as trouvé ça dans un QCM? il y a une heure, lorinne a dit : *par rapport à l'immunolyse dépendante du complément pourquoi dit-on qu'elle repose sur le mecanismes de lyse des cellules prealablement recouvertes d'ac par le complement ? Ici ça fait appel à des notions d'Immunologie. Pour faire simple, le complément est un système formé de protéines inactivés. Il doit être activé. Comment est-il activé, me diras-tu? Il y a 3 voies mais celle dont on parle est la voie classique et elle débute par la reconnaissance du complexe Ac-Ag Du fait de cette reconnaissance, il y a activation du complément et donc lyse il y a une heure, lorinne a dit : *comment la sequence peptidique de l'antigene constituant l'épitope B peut etre cartographié par dot-blot ? Ici, on va reconnaitre à chaque fois une partie de la séquence! il y a une heure, lorinne a dit : *j'ai pas compris la différence entre dot-blot et western blot ? Le Dot-Blot est un variant du western blot Pour le Western Blot, il y a tout d'abord séparartion des protéines puis migration sur une membrane de nitrocellulose Pour le Dot-Blot il y a directement migration , sans séparation il y a une heure, lorinne a dit : *on est d'accord que dans la méthode d'ELISA on ne denature pas, nn? Non, il n'y a aucune dénaturation! ELISA est juste la reconnaissance d'antigènes solubles. il y a une heure, lorinne a dit : *pourquoi la technique d'ELISA nécessite que les anticorps anti-protA soient dirigés contre des épitopes differents ? Je ne sais pas si j'ai bien compris ta question, mais l'Ag soluble contient au moins 2 épitopes différents. Donc on cible des épitopes différents pour être spécifiques. C'est bien ce que tu demandais? Quote
Solution vb27 Posted March 9, 2021 Solution Posted March 9, 2021 Bonjour! - Alors oui, les récepteurs des lymphocytes B reconnaissent la forme native de l'Ag, donc les épitopes sont conformationnels/non dégradés. A contrario, les récepteurs des lymphocytes T eux reconnaissent l'Ag présenté par le CMH après avoir été dégradé par des enzymes extracellulaires. - C'est dans le cours ça? - Cette technique ne repose pas sur des Ac du complément (je ne sais pas où tu as lu ça) mais en fait, on met dans un tube à essai la cellule qui porte notre AG d'intérêt puis on y met du sérum. Ensuite, on rajoute des PROTEINES (et non des Ac) du complément. Si il y a lyse, cela signifie qu'un complexe Ag-Ac s'est formé. - On séquence les AA de l'Ag, ensuite dans une banque de peptides on cherche des peptides qui a mis les uns à la suite des autres forment notre séquence d'Ag. Puis tu fais un dot blot, tu poses tes échantillons et tu rajoutes des Ac. Tu fais une révélation par des Ac secondaires marqués. Et du coup les peptides marqués te permettent de connaître exactement les AA de l'épitope. - La différence entre Dot-blot et Western blot c'est juste que tu rajoutes une électrophorèse SDS PAGE au western blot (technique qui fait migrer les protéines en fonction de leur taille sur un gel par un champ électrique) - En ELISA il n'y a pas de dénaturation en effet. - Je ne comprends pas trop ta question! Quote
lorinne Posted March 9, 2021 Author Posted March 9, 2021 il y a 27 minutes, EmmaFerjani a dit : Est-ce que tu as trouvé ça dans un QCM? encore merci beaucoup pour tes réponses ! oui un item proposait que le pull down était une technique d'immunoprécipitation et c'était compté faux ? @vb27merci!<3 Quote
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