Vecteurs

[loukoum01]

Hello, e comprends pas pourquoi la C est juste, théoriquement si j'ajoute un ADNc de 450pb à un vecteur de 7500pb j'obtiens un vecteur de 7950 pb alors pourquoi ici on me dit 7800pb juste ?

merci

 

+

 

On parle de quelles enzymes quand on dit ça: La recombinaison homologue fait intervenir des enzymes présentes de façon endogène dans les cellules embryonnaires.

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je comprends pas non plus comment (AB justes) une électrophorèse peut nous dire que c'est exprimé ? Pour moi un SDS ne nous donne que la taille donc comment on peut savoir que la protéine s'exprime ? (si vous avez la liste des techniques dans lesquelles on voit l'expression je veux bien parce que je me perds)

 

 

merciiiiiiiiiiiiiiiiiiiii

Edited March 4, 2021 by loukoum01

[OxyGenS]

Salut,

 

1- Tu fais agir HindIII et Not1 à la fois sur le cDNA mais aussi sur le plasmide !! --> tu as une partie du plasmide qui s'en va : c'est celle contenue entre ces 2 sites de clivage.

Sur le plasmide tu perds donc : 600-450 = 150 --> le plasmide fait alors 7500-150 = 7350

Plasmide + insert : 7350 + 450 = 7800pb

 

2- Je ne suis pas sûre, attends confirmation mais je dirais qu'on fait réf notamment aux ligases.

 

3-

A : Ici on te dit qu'on extrait les protéines du lait donc forcément si la protéine est révélée c'est qu'elle s'exprime et qu'elle a été excrétée.

Il manque des données pour pouvoir dire qu'elle fait bien 16,5kDa mais j'imagine que tu les as dans le QCM 3

B : Le dot blot c'est le même principe que le WB dans le sens où tu veux voir si telle protéine est présente dans l'extrait analysé. Tu pourras juste dire si elle est +/- présente en fonction de l'intensité de la couleur (sur le dot blot) ou de la taille de la bande sur WB.

J'ai pas encore revu tout le cours du Pr. Segui, il me manque certainement qques infos mais dans le cas présent il me semble qu'on fixe la conceptine au fond du puits.

Mais ici ce qu'on fait c'est que tu as un 1er Ac dirigé contre la conceptine et un 2è (lié à un fluorochrome ou autre moyen de révélation) qui lui, reconnaît le 1er Ac et il me semble que c'est un ELISA indirect.

[loukoum01]

D'accord oui c'est logique en fait c'est pour ça que e me trompais tout le temps, je faisais pas agir su rles deux !!

 

2- j'attends la confirm alors  

 

3- Du coup quand on obtient la protéines dans tous les cas c'est qu'elle s'exprime ? Parce que moi ce qui me turlupinait ( je suis super nulle en recherche déso pour mes questions bêtes) c'est qu'on dit que par ex avec une recombinaison homologue on a le transgène dans toutes les cellules mais il ne s'exprime pas forcément donc en fait si e suis la logique, c'est que si il ne s'exprimait pas on en n'aurait pas dans le lait vu que la protéine ne serait pas sécrétée. J'ai compris c'est bueno (fallait que ça monte au cerveau)

merciii à toi du coup !

[OxyGenS]

il y a une heure, loukoum01 a dit :

Du coup quand on obtient la protéines dans tous les cas c'est qu'elle s'exprime ?

il y a une heure, loukoum01 a dit :

en fait si e suis la logique, c'est que si il ne s'exprimait pas on en n'aurait pas dans le lait vu que la protéine ne serait pas sécrétée

Hehe oui tu as trouvé toute seule

 

il y a une heure, loukoum01 a dit :

Parce que moi ce qui me turlupinait ( je suis super nulle en recherche déso pour mes questions bêtes) c'est qu'on dit que par ex avec une recombinaison homologue on a le transgène dans toutes les cellules mais il ne s'exprime pas forcément

Ce qu'il faut comprendre avec les vecteurs c'est que même si ton cDNA s'est intégré, il peut être dans le mauvais sens, c'est-à-dire que l'ATG initiateur est du côté du terminateur (alors qu'il faut qu'il soit derrière le promoteur) --> dans ce cas tu n'auras pas la protéine car elle ne sera pas traduite.

Par contre le cDNA sera transcrit peu importe qu'il se soit intégré dans le bon sens ou non.

 

C'est plus clair ?

[loukoum01]

yes merci bcp ça va mieux !!