Recherches

[valouz]

Bonjour,

Comme on sait que l'on doit regarder les résultats du lysat et non pas ceux de l'immunoprécipitation juste en-dessous pour répondre à l'item B ? Et inversement pour l'item E?

https://www.casimages.com/i/210228093045407688.png.html

Merci d'avance ! 

[DalaiMaya]

Coucou  

Alors, pour l'item B, la question est de savoir si l'expression de p53 augmente après irradiation. De ce fait, tu regardes dans le lysat si, après UV, la bande change,  parce on veut voir si la protéine est plus présente dans le milieu ( et son interaction avec MDM2 n'a pas d'importance ici / on regarde si elle est plus ou moins produite ). Tu vois que la bande  anti-p53 est plus grande donc c'est juste. La bande anti-MDM2 est plus grosse aussi, ce qui laisse penser à une interaction, ou du moins un mécanisme commun, entre p53 et MDM2 mais tu ne peux rien conclure ici : il faut faire l'immunoprécipitation. ( NB: l'actine est le contrôle ).   

Remarque : La protéine p53 va être produite dans la cellule puis, les chercheurs lysent ces cellules ( on se retrouve avec un espèce de mélange de tous les composants cellulaires, protéines, membranes, ... ) . Par l'anticorps anti-p53, tu vois si la protéine est produite ou non, ainsi que son intensité d'expression. 

 

Pour l'item E, tu dois regarder l'immunoprécipitation car on te demande de caractériser une interaction ( ou plutôt la perte d'interaction entre p53 et MDM2 ). Tu vois que après UV, il n'y a plus la bande de p53, ce qui signifie qu'il y a perte d'interaction entre les deux protéines. Mais p53 ne disparait pas du milieu ( item B) et c'est confirmé par la bande de MDM2 qui reste constante. 

Remarque sur le principe de l'immunoprécipitation : Ici, tu vas avoir des billes avec des anticorps anti-MDM2 collés dessus ( la protéine A est reconnue par le fragment Fc des Ac ). Donc, ils vont capter le MDM2 présent dans le milieu et s'il y a interaction, p53 va être accroché aussi au MDM2 et attrapé. Le complexe est récupéré. Ensuite, les chercheurs détectent la présence de MDM2 avec des Ac anti-MDM2 ( pour voir si l'expérience a marché et s'ils ont récupéré du MDM2 ). Ils mettent aussi des Ac anti-p53 pour voir s'il est accroché à MDM2 ( donc interaction ). S'il n'y avait eu aucune bande pour p53, cela aurait signifié qu'il ne se fixe pas au MDM2 et donc qu'il est élué avec le reste. 

 

J'espère avoir été claire, n'hésite pas si tu as des questions  

Courage !  

[valouz]

@DalaiMaya d'accord merci beaucoup c'est très clair ! du coup pour savoir s'il y a des interactions c'est immunoprécipitation et si c'est pour voir l'expression on regarde notre lysat ou si on aurait eu un ELISA on aurait regardé l'ELISA vu qu'il illustre l'expression non ? 

 

J'ai une autre question rien à voir avec ça, dans les cours de Bettina c'était juste pour être bien sûr, on parle de gène KO si on fait une recombinaison non homologue, par contre si on fait une recombinaison homologue c'est plus un KO non ? Et ça serait quoi du coup ?  

 

Encore mercii !!