LeCarnassier Posted February 27, 2021 Share Posted February 27, 2021 (edited) QCM 1 à 3. La maladie neurodégénérative M se caractérise par la présence dans les neurones d’agrégats de la protéine P sous une forme phosphorylée sur la sérine 129 (P129p).Afin de produire des anticorps monoclonaux (Ac) spécifiques de P129p, vous produisez une forme recombinante de P que vous purifiez et phosphorylez in vitro. Après les différentes étapes de production d’hybridomes chez la souris, vous criblez les surnageants de culture par ELISA sur P et sur P129p. Ac1 à Ac9 désignent à la fois les différents hybridomes et les anticorps produits par chacun de ces hybridomes. UA : unités arbitraires C : contrôle négatif sans anticorps Vous choisissez de caractériser les Ac1, Ac2 et Ac9 par immunotransfert. Vous souhaitez évaluer leur capacité à reconnaître les formes agrégées ou non de P129p. Pour cela, vous réalisez des électrophorèses de P129p comparativement en conditions réductrices et dénaturantes (+) ou non (-). Immunotransfert sur P129p en conditions réductrices et dénaturantes (+) ou non (-). Le poids moléculaire d’un monomère de P phosphorylé ou non est d’environ 20 kDa. QCM 1. A. Les hybridomes Ac5, Ac7 et Ac8 ne secrètent pas d’Ac ou produisent des Ac qui ne sont spécifiques ni de P ni de P129p.B. La sérine 129 phosphorylée est obligatoirement présente dans le ou les épitope(s) reconnu(s) par les Ac3 et Ac6.C. Les bandes observées autour de 20 kDa correspondent à P129p.D. Les trois bandes observées autour de 100 kDa correspondent à des formes multimériques (agrégats) de P129p qui disparaissent en conditions réductrices et dénaturantes.E. L’Ac2 reconnaît un épitope conformationnel présent sur P129p. QCM 2. Vous voulez vérifier que vos Ac ne présentent pas de réactivité croisée avec une protéine normalement phosphorylée dans les neurones, la protéine NF1 de 68 kDa.Vous analysez la réactivité de vos Ac sur des extraits protéiques de tissu cérébral d’individus témoins (T) et de malades (M), en dot blot et en immunotransfert après PAGE-SDS. T : témoin ; M : malade Ac-NF1 : anticorps monoclonal spécifique de NF1 A. NF1 est présent chez les témoins comme chez les malades.B. P129p est présente chez les témoins comme chez les malades.C. L’Ac2 reconnaît un épitope conformationnel commun à P129p et NF1.D. L’Ac9 reconnaît un épitope séquentiel commun à P129p et NF1.E. Parmi les anticorps monoclonaux spécifiques de P129p, tous reconnaissent ses formes agrégées. QCM 3. Vous souhaitez développer un test biologique pour le diagnostic de la maladie M permettant d’évaluer dans le LCR (liquide céphalo-rachidien) des patients la quantité de la forme soluble non agrégée de P129p, seule forme capable de diffuser. A. Vous pouvez doser P129p en ELISA indirect avec l’Ac2.B. Vous pouvez doser P129p en ELISA sandwich avec les Ac1 et Ac2.C. Sous réserve d’avoir une concentration suffisante de P129p, vous pouvez évaluer semi- quantitativement P129p par immunotransfert après électrophorèse en PAGE-SDS avec l’Ac1. D. Sous réserve d’avoir une concentration suffisante de P129p, vous pouvez évaluer semi- quantitativement P129p par immunotransfert après électrophorèse en PAGE-SDS avec l’Ac9. E. Vos outils ne vous permettent pas de réaliser un dosage quantitatif de P129p. Salut je ne comprend pas trop dans la QCM1 la A est vraie et B fausse. dans le QCM2 la E je ne vois pas ce qu'ils veulent dire par forme agrégée (elle est vraie) Et enfin le QCM3 pq la A est fausse et B vraie alors que je pensais qu'en Elisa indirect on dosait les Ac et là c'est ce qu'on veut faire non? Alors pq utiliser une Elisa sandwich qui va doser les Ag?? Merci d'avance a celui qui me répondra Edited February 27, 2021 by OfCourseAndYou Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
LeCarnassier Posted February 27, 2021 Author Share Posted February 27, 2021 (edited) https://moodle.univ-tlse3.fr/pluginfile.php/474664/mod_resource/content/1/2016-2020 Annales UE8 PACES.pdf Bon dcp si vous arrivez a voir c'est les 3 derniers qcm Edited February 27, 2021 by OfCourseAndYou Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Looooooo Posted February 27, 2021 Solution Share Posted February 27, 2021 Salut ! Alors, QCM 1 : - A, cet item est vrai parce que tu vois dans le premier encadré que les Ac 5, 7, 8 ont une densité optique (DO) très faible par rapport aux autres Ac (considère les comme nulles, elles sont exactement similaires au contrôle sans Ac) - B, l'item est faux, Ac 3 et Ac 6 reconnaissent aussi bien la P129p que la P, cela signifie qu'ils reconnaissent un épitope commun aux deux formes or on te parle dans l'item de la sérine phosphorylée, spécifique de la P129p QCM 2 : - E, item vrai, forme agrégée = forme multimérique (agrégats) de P129p de 100 kDa. Avec l'encadré du QCM2 tu conclus que les Ac1 et 2 sont les seuls spécifiques de la P129p (ils ne reconnaissent ni P ni NF1). Ensuite, en revenant sur l'encadré juste au dessus du QCM 1, tu vois que les 2 Ac en question reconnaissent les formes de 100kDa (forme agrégées) QCM 3 : -A, item faux, en ELISA indirect tu doserais effectivement des Ac or on souhaite ici doser une protéine (ce que tu apparents aux Ag). Ici on veut doser une protéine=Ag à l'aide d'Ac donc il faut se tourner vers une technique type ELISA direct. - B item vrai, faire un Elisa sandwich avec ces Ac1 et 2 a permettra tout à fait de doser la forme soluble non agrégée de P129p Petit rappel sur les différents techniques d'Elisa : - ELISA direct = détection et dosage d'Ac -> classique (=fixation Ag à doser sur un support et ajout d'un Ac) -> sandwich (=utilisation de 2 Ac spécifiques d'un même Ag pris en sandwich) - ELISA indirect = détection et dosage d'Ac Voilaaa, j'espère que ça va mieux avec ces explications, dit moi s'il reste certains points flous pour toi ! Bonne journée LeCarnassier and Sarhabdomyocyte 1 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
LeCarnassier Posted February 27, 2021 Author Share Posted February 27, 2021 Parfait merci bcp c'est plus clair maintenant!!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Pikachumab Posted March 7, 2021 Share Posted March 7, 2021 Salut @Looooooo, Je comprend pas pourquoi le C et la D du QCM 3 sont vraies alors que la forme agrégée est censée être de 100kDa et elle disparait en immunotransfert non ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
LeCarnassier Posted March 7, 2021 Author Share Posted March 7, 2021 Il y a 1 heure, pikachumab a dit : Salut @Looooooo, Je comprend pas pourquoi le C et la D du QCM 3 sont vraies alors que la forme agrégée est censée être de 100kDa et elle disparait en immunotransfert non ? on te parle de la forme non agrégée donc celle a 20 kDa Sarhabdomyocyte 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Pikachumab Posted March 7, 2021 Share Posted March 7, 2021 AH oui je suis con merci beaucoup @FondaPariNux Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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