Identification antigènes tumeurs

[OxyGenS]

Bonjour !

 

 

Ici on met les mêmes plasmides dans le même puit dans les 2 plaques (bien sûr à droite on ajoute les cellules normales et les LT), on regarde à droite dans quels puits il y a lyse des cellules. Ainsi on identifie les plasmides portant un gène codant pour un antigène responsable de tumeur ; on séquence ce dernier afin de le caractériser.

C'est bien ça l'expérience ?

 

Merci

[Apo311]

Bonsoir

 

alors en fait chaque puits contient un plasmide différent, qui sont mis en présence de
cellules normales: transfection (le plasmide rentre dans le cellule normale), le gène présent dans le
plasmide va pouvoir être exprimé et la cellule normale présentera la protéine correspondante.
- Mise en présence de LT dans chaque puits.
Si le plasmide dans un puit n’exprime pas le bon Ag , la protéine rouge ne sera pas exprimée, et il n’y
aura pas d’activation du lymphocyte T et donc pas de lyse.
Si le plasmide exprime la protéine tumorale , le complexe peptide/ CMH va être présenté à la
membrane de la cellule, reconnu par le lymphocyte qui va être activé et qui va lyser la cellule.

[OxyGenS]

Salut @Apo311, merci pour ta réponse !

 

Mais on est d'accord que sur la plaque de gauche on met les plasmides seuls et dans les mêmes puits qu'à droite (ex : dans le puits 1 on met le plasmide X à la fois dans la plaque gauche et dans celle de droite) ? De telle sorte à avoir accès et identifier notre plasmide produisant un Ag de tumeur facilement.

 

J'ajoute 2 questions :

1) Comment sait-on qu'il y a lyse des cellules ? Il y a un marqueur de couleur par exemple ?

2) A gauche on voit qu'il y a 2 puits numérotés "15". Est-ce une erreur ? On numérote bien 1 par 1 ?

 

[Apo311]

oui dans celle de gauche, il y a que les plasmides et on met les même à droite et à gauche.

 

1) oui il peut y avoir des marqueurs de couleurs ou bien par mesure de Cr relargué. Le Cr étant rélargué lorsqu'il y a une lyse cellulaire

2) alors je pense que c'est une erreur et qu'on numérote un par un mais je ne suis pas sure 

 

j'espere que c'est clair

[OxyGenS]

il y a 48 minutes, Apo311 a dit :

par mesure de Cr relargué. Le Cr étant rélargué lorsqu'il y a une lyse cellulaire

Dsl je ne vois pas ce qu'est le Cr

 

Sinon c'est bon pour moi ! Merci

 

Il y a 5 heures, OxyGenS a dit :

2) A gauche on voit qu'il y a 2 puits numérotés "15". Est-ce une erreur ? On numérote bien 1 par 1 ?

il y a 49 minutes, Apo311 a dit :

2) alors je pense que c'est une erreur et qu'on numérote un par un mais je ne suis pas sure 

@Hypnos ou @PierrickSenior vous pouvez confirmer svp ?

[Apo311]

Le Cr c'est le chrome. lorsque la cellule est lésée, elle en relargue

[OxyGenS]

il y a une heure, Apo311 a dit :

Le Cr c'est le chrome. lorsque la cellule est lésée, elle en relargue

C'est valable peu importe le type cellulaire ?

Et c'est précisé en cours ?

[Apo311]

il y a 39 minutes, OxyGenS a dit :

C'est valable peu importe le type cellulaire ?

Et c'est précisé en cours ?

oui et c'est s'ils te disent "cellules infectées marquées" et ensuite elles sont incubées avec des LT CD8 et lyse 

[Hypnos]

3 hours ago, OxyGenS said:

4 hours ago, Apo311 said:

 

@Hypnos ou @PierrickSenior vous pouvez confirmer svp ?

Oui oui je confirme

 

2 hours ago, OxyGenS said:

C'est valable peu importe le type cellulaire ?

Et c'est précisé en cours ?

On le voit dans le cours de SEGUI ça permet d’évaluer la viabilité cellulaire 

 

en effet on met du Cr (51 je crois), qui est radioactif, dans un milieu de culture, puis on lave les cellules qui l’ont incorporé.

Tznt qu’il est dans les cellules la radioactivité mesurée est négligeable, puis s’il y a lyse, on libère de manière massive du Cr51 dans le milieu, et donc ça permet de quantifier l’importance de la lyse

 

est-ce pkus clair ?

[OxyGenS]

J'ai compris, merci @Apo311 @Hypnos