WB

[Oogway]

Heyy

Je me demandais, au sujet du sds page, il y a uun truc qui n'est pas clair dans ma tete:

-est ce qu'il implique TOUJOURS l'utilisation de reducteur?

-est ce qu'il induit la denaturation des proteines de telle facon a ce qu'elles soient TOUTES monomeriques?

-et qu'en est-il des coupure intrachaine? pcq c'est une chose que les proteines soient monomeriques, mais si en plus dans les monomeres y'a des SS intra chaine, ca devient compliqué a analyser tout ca non?

Dans le qcm ci dessous:

https://goopics.net/i/X7ygl

E est vrai, mais en soit ca aurait aussi pu etre une denaturation de l'aquaporine non?

[unenoiraude]

Bonjour @manoncrtt

Alors non le sds page n'implique pas toujours l'utilisation d'un agent réducteur.

Les protéines solubilisées dans ce sds page ne seront pas toutes monomériques (je vais t'expliquer en dessous pourquoi)

Alors pour que tu comprennes bien, petit rappel sur la technique de sds Page.

Pour la partie sds: le sds est un détergent qui va dissocier les interactions faibles et charger les protéines négativement. Mais attention il ne dissocie pas les ponts disulfures (ça c'est le rôle du bêta mercaptoéthanol ou BME par exemple qui lui est un agent réducteur).

Pour la partie PAGE: A cause du sds les protéines vont migrer seulement en fonction de leur masse (elles sont toutes chargées négativement donc migreront toutes vers le pole +).

-> donc dans la technique de sds page on utilise toujours un détergent (le sds) mais l'utilisation d'un agent réducteur est facultative

-> le sds solubilise l'homogénat cellulaire en agissant sur les liaisons faibles. Mais si tu as deux monomères liés par un pont S-S, ce dimère le reste tant qu'on utilise pas un agent réducteur

-> les ponts S-S intra chaines ne seront coupés que par un agent réducteur également (dans le cas ou on te dit qu'on fait un sds page où on a ajouté du BME)

[unenoiraude]

pour le qcm, qu'est ce que tu entends par "ça aurait pu être une dénaturation de l'AQP"?

[Oogway]

@unenoiraude

Coucou! un grand merci pour ta reponse, je pense que j'avais besoin de ces revisions, les qcms vont etre plus clairs maintenant!!!

Et oui aha pour ma question pas claire, je te repose le contexte ca peut aider:

enfait la figure de droite est obtenue apres avoir fait un western blot sur un extrait cellulaire d'aquaporines, et on obtient 2 bandes, donc effectivement ca peut etre du a la presence d'une forme native et glycosylée

Mais vu qu'on a fait un WB, et que les aquporines sont donc dénaturées (séparation des sous unités), le résultat pourrait aussi s'expliquer par ue rupture de liaison entre 2 sous unités?

[unenoiraude]

Avec plaisir pour ces petites révisions.

Alors je ne voudrais pas te dire de bêtises mais comme on dénature les protéines en faisant un WB, on va casser les interactions faibles seulement. Comme je te l'ai dit plus haut, pour casser des liaisons plus fortes de type S-S il faut un agent réducteur. 

A partir de là, ton hypothèse est possible si les sous unités hypothétiques de ta protéine sont liées par des liaisons faibles. Mais si par exemple elles sont liées par un pont disulfure elles ne seront pas séparées en WB classique.

Bonne chance pour la suite 

[Oogway]

• @unenoiraude merci encore!