niiinou Posted February 13, 2021 Posted February 13, 2021 Bonjour Je ne comprends pas ce QCM... pourquoi on injecte deux vecteurs guides ? Et pourquoi on dit que c’est de la transgénèse additive ? Je pensais que pour obtenir des KO on faisait de la recombinaison non homologue... Reveal hidden contents Réponses vraies : ADE Quote
OxyGenS Posted February 13, 2021 Posted February 13, 2021 Salut, ce QCM me pose aussi pb. On 2/13/2021 at 11:15 AM, niiinou said: pourquoi on injecte deux vecteurs guides ? Expand Pour moi c'est pour faire 2 sites de coupure et ainsi enlever un fragment On 2/13/2021 at 11:15 AM, niiinou said: Et pourquoi on dit que c’est de la transgénèse additive ? Expand Ça je n'ai vraiment pas compris, j'attends la réponse avec toi On 2/13/2021 at 11:15 AM, niiinou said: Je pensais que pour obtenir des KO on faisait de la recombinaison non homologue... Expand Comme on voit dans le cours de Bettina, on peut aussi faire un KI par recombinaison homologue si on remplace le gène ciblé par un gène rapporteur. J'ajoute 2 questions : - si on fait un KO via RH est-ce que dans l'énoncé on nous dira qu'on injecte (en plus des ARN guides...) un gène de résistance (et éventuellement un gène codant une couleur) ? - en pratique les KO se font plus par RH que RNH non ? pour pouvoir insérer un gène de résistance à un antibio ? niiinou 1 Quote
Ancien Responsable Matière Solution PierrickSenior Posted February 16, 2021 Ancien Responsable Matière Solution Posted February 16, 2021 Salut @niiinou et @OxyGenS, Le fait d'introduire plusieurs ARN guide permet au système Cas9 de provoquer un KO pour plusieurs gènes. Soit ici les ARNs guide vont diriger la Cas9 vers deux gènes pour provoquer 2 pertes de fonction et donc 2 KO au sein du génome. Pour l'item A je suis assez dubitatif, je vais faire des recherches et revenir vers vous. D'ou viens le CM stp ? On 2/13/2021 at 1:31 PM, OxyGenS said: - si on fait un KO via RH est-ce que dans l'énoncé on nous dira qu'on injecte (en plus des ARN guides...) un gène de résistance (et éventuellement un gène codant une couleur) ? Expand Je ne pense pas que les professeur incitent sur ça. Pour eux c'est important de savoir ce qu'est un KO mais on demande rarement comment il est obtenu dans les QCMs, sinon oui tout les éléments pour comprendre seront donnés. On 2/13/2021 at 1:31 PM, OxyGenS said: - en pratique les KO se font plus par RH que RNH non ? pour pouvoir insérer un gène de résistance à un antibio ? Expand Je n'ai aucune idée de ce qui est le plus utilisé en labo. Bonne soirée à vous. niiinou and Hypnos 2 Quote
OxyGenS Posted February 16, 2021 Posted February 16, 2021 Merci @PierrickSenior pour ta réponse ! On 2/16/2021 at 7:38 PM, PierrickSenior said: Le fait d'introduire plusieurs ARN guide permet au système Cas9 de provoquer un KO pour plusieurs gènes. Expand Quand on introduit un seul ARN guide on fait un KO via RNH c'est ça ? Mais si on veut faire comme illustré dans une diapo de Bettina (cf en dessous) on fait une RH pour remplacer le gène initial par un gène "inactif" (codant une résistance à un antibiotique) ? Reveal hidden contents Et je me suis embrouillée j'ai un doute, quand on veut faire une RH il faut 2 cassures double brin donc 2 ARN guides ? On 2/16/2021 at 7:38 PM, PierrickSenior said: Pour l'item A je suis assez dubitatif, je vais faire des recherches et revenir vers vous. D'ou viens le CM stp ? Expand Poly du TAT S2 2021 Quote
Benoiwr Posted February 17, 2021 Posted February 17, 2021 Salut @OxyGenS! On 2/16/2021 at 8:01 PM, OxyGenS said: Quand on introduit un seul ARN guide on fait un KO via RNH c'est ça ? Expand Pour moi quand on met un seul ARN guide on fait un KI (insertion de gène humain) par recombinaison homologue (RH). Pour le KO par RNH, il faut au moins deux ARN guides (et Cas9). On 2/16/2021 at 8:01 PM, OxyGenS said: Mais si on veut faire comme illustré dans une diapo de Bettina (cf en dessous) on fait une RH pour remplacer le gène initial par un gène "inactif" (codant une résistance à un antibiotique) ? Expand Oui tout à fait on peut faire un KO comme ça. Par RH on remplace un certain gène par un autre (qui sert de résistance aux antibiotiques donc pas du tout la même fonction que le gène de base) du coup comme il n'y a plus le gène de base on a fait un KO du gène. On 2/16/2021 at 8:01 PM, OxyGenS said: Et je me suis embrouillée j'ai un doute, quand on veut faire une RH il faut 2 cassures double brin donc 2 ARN guides ? Expand Pas forcément, par exemple pour faire un KI par RH il y a bien deux cassures double brin mais on n'insère que Cas9, une ADN donneur et un ARN guide. L'ADN utilisé comme matrice, ce qui permettra l'insertion d'un nouveau gène dans l'organisme. J'espère que j'ai pu t'aider ! Quote
OxyGenS Posted February 17, 2021 Posted February 17, 2021 @Benoiwr Merci ! Je m'étais emmêlée les pinceaux avec les différentes techniques, je pense que c'est plus clair mtn Benoiwr 1 Quote
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