ST1 Pâques 2019

[OxyGenS]

Bonjour !

 

1) "La chromatographie d’exclusion permet de dire si une protéine est constituée d’un monomère ou d’oligomères" VRAI.

C'est effectivement ce qui est écrit dans le cours mais je crois que je n'ai pas bien compris comment on détermine cela.

Dans le cas où on a une protéine inconnue, comment savoir si elle est oligomérisée ou pas ?

 

2) 4C vrai : "c'est la méthode d'élution pour la chromatographie d'affinité Ac-Ag"

Révélation

Je n'ai pas noté cette info dans le cours, le précise-t-elle encore cette année ?

Et il y a-t-il d'autre moyen d'élution spécifique pour la chromato d'affinité à connaître ? (Par exemple pour le glutathion et His6 on utilise le phénomène de compétition +++ si ce n'est tjs)

 

Merci

[AthosPorthosAramisDartos]

Saloute !
 

il y a 57 minutes, OxyGenS a dit :

Dans le cas où on a une protéine inconnue, comment savoir si elle est oligomérisée ou pas ?

Et ben je me suis posé exactement la même question que toi l'an dernier, je n'ai pas trouvé de réponse par contre, désolé :/. Retiens simplement que la chromatographie d'exclusion permet de faire cette distinction. Pour ma part je suis parti du principe que c'était parce qu'on connaissait la taille des monomères, donc un polymère sera plus massif donc son Ve changera.

Pour ta seconde question, je ne sais pas si ça a été dis en cours cette année mais oui l'élution d'une chromatographie d'affinité Ac-Ag est bien faite par diminution du pH (qui va perturber et rompre la liaison entre l'épitope et l'Ac).
Pour la chromatographie d'affinité il faut retenir qu'il existe globalement 2 mécanismes d'élution : la modification du pH ou de la force ionique (pour Ac-Ag) et la compétition.
Les cas particuliers qu'il faut retenir sont :

-les étiquettes GST, qui sont retenues par un support couvert de glutathion et éluées par compétition avec du glutathion également.
-les étiquettes 6-His, retenues par cobalt et nickel, éluées par compétition avec Imidazole principalement mais aussi par EDTA qui délie carrément le nickel de la colonne et donc nécessite de régénérer la colonne pour une autre chromato; et enfin par modif du pH qui change la charge de l'His.

Retiens surtout imidazole ici

[MOoodLeEEee]

Re! Pour la 1), en effet ta chromatographie d'exclusion est dénaturante donc elle va dénaturer tes oligomères en différentes sous-unités. Néanmoins, elle est inutilisable pour les protéines qui contiennent plusieurs fois la même sous-unité, telles que les homodimères, homotétramères... 

Donc oui elle permet de dire si ta protéine est manométrique ou oligomérique. 

[OxyGenS]

Merci à vous 2 @AthosPorthosAramisDartos @MOoodLeEEee !