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Pyroséquençage


Go to solution Solved by Laurine,

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Bonjour !

Voilà sur la colle du 24/10/2013 , dans la partie sur le génome , j'ai un petit problème sur le QCM 11.

L'item C , on nous dit en réponse que le pic va être 2 fois plus haut que les autres pics représentés car le dNTP ajouté va pouvoir s'associé à 2 bases successives. Je ne comprend pas pourquoi celui-ci peut s'associer à deux bases alors que les autres non..

Et pour l'item D , on nous dit que l'ATP et la luciférine sont les deux substrats de la luciférase qui produit de la lumière. Mais on nous dit aussi dans un autre item (QCM 8 item E) que la luciférase n'est que l'enzyme qui permet à la luciférine de produire de la lumière.

Quelqu'un pour m'éclairer ?

 

  • Solution
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Salut :)

 

alors le principe du pyrosequençage c'est d'ajouter sequentiellement les dNTP  , si celui ci est le bon ( cad complementaire du brin matrice :  A-T   G-C ) il va etre insérer dans le brin en cours de synthèse , et c'est cette insersion qui va libérer du PPi qui va déclencher la chaine enzymatique à l'origine de la lumière , si ce n'est pas le bon il n'y aura pas de lumière -> la synthèse s'arrete car on ne peut pas "sauter" un nucléotide , la lecture se fait linéairement 

 

donc si dans le brin matrice les 3 prochaines bases qui doivent etre synthétisées sont 5' ----CGG ----- 3' et que l'on injecte du dCTP , la première liaison avec G va se faire , la deuxième aussi mais quand on arrive sur le C , le dCTP ne peut pas si lier et donc on arrête la synthèse et il ne se passe plus rien . On va nettoyer puis recommencer avec un autre dNTP  : si on injecte du dGTP il y aura un pic , si on injecte du dTTP il ne se passera rien par exemple

 

 

En ce qui concerne la réaction enzymatique c'est bien la réaction ATP + luciferine  qui est catalysée ( accélérée , facilité ) par l'enzyme lucyférase . C'est la réaction qui va produire de la lumière et non l'enzyme.

en gros , les substrats ( atp et luciferine ) sont transformés en produits (lumière) et vont disparaître au cours de la réaction alors que l'enzyme (luciférase) ne fait qu'accélérer la réaction et sera toujours présente en fin de réaction

 

si tu ne mets pas de luciférase la réaction aura quand meme lieu mais en quantité toute petite

si tu mets uniquement de la luciférase et de l'atp  ( pas de luciferine)  il ne se passera rien du tout

 

j'espère que c'est un peu plus clair ,sinon n'hésite pas !

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