Vecteurs

[loukoum01]

COucou, j'ai du mal avec ce QCM ( sauf la A et B) du coup si vous pouviez m'aider ? (réponses: ACDE)

Edited January 30, 2021 by loukoum01

[Rebeccathéter]

coucou,

 

Pour la C, elle est vraie car le gène de GFP est inséré de telle sorte à ce que la GFP soit une étiquette de la Limousine.

Ces 2 gènes seront tous les deux insérés grâce au plasmide dans le fibroblaste. Ils sont "interdépendants" car l'ATG se trouve sur le gène qui code pour la GFP et le codon STOP est sur celui qui code pour la Limousine, ce qui signifie que pour que la GFP soit exprimée, c'est-à-dire qu'il y ait traduction complète, la Limousine l'est aussi, donc son gène est forcément présent dans le génome.

 

Pour la D, comme j'ai expliqué dans la C, vu qu'on parle toujours des fibroblastes qui expriment la GFP, la Limousine est forcément aussi exprimée.

 

Pour la E, je passe mon tour

[PhosphatidylFlorine]

Salut @loukoum01, je viens compléter @Rebeccathéter pour la E. 

Tu pars de ton plasmide de 8kb, tu coupes par les enzymes de restriction Nnn et Kkk à la fois sur ton plasmide et sur ta cassette d'expression. Une partie de ton plasmide va donc être enlevé (entre Nnn et Kkk) et d'après les données sur les tailles que tu as en bas à droite la partie qui sera supprimée du plasmide fera 1.3kb. 

De plus sur ta cassette d'expression après digestion par les endonucléases de restriction tu te retrouves avec un fragment de 700b soit 0.7kb. 

Donc finalement ton vecteur recombinant fera 8-1.3+0.7 kb soit 7.4kb. 

Est ce que c'est plus clair pour toi ? 

[loukoum01]

Super merci à vous deux ! Mais en fait j'avais pas vraiment compris que la GFP serait une étiquette de la limousine et je comprends toujours pas trop si vous pouvez juste m'expliquer ce point svp ? Parce qu'après tout est clair mercii

[PhosphatidylFlorine]

 

il y a 44 minutes, loukoum01 a dit :

Super merci à vous deux ! Mais en fait j'avais pas vraiment compris que la GFP serait une étiquette de la limousine et je comprends toujours pas trop si vous pouvez juste m'expliquer ce point svp ? Parce qu'après tout est clair mercii

Je vais essayer de t'expliquer avec mes mots tu me diras c'est plus clair pour toi. 

Alors on voit sur la représentation de la cassette d'expression que l'on a: promoteur-GFP-gène dnsLMSN-poly A. 

Pour moi vu que la GFP et le gène sont sous le contrôle du même promoteur et sont dans le même cadre de lecture si l'un des deux est présent l'autre aussi et si l'un s'exprime alors l'autre aussi (d'où item C et D vrais). Vu que la GFP est fluorescente tu pourras la détecter facilement et vu que si elle est exprimée le gène aussi on peut dire que c'est une étiquette de la limousine. 

 

 

[loukoum01]

D'accord je pense que j'ai ! Merci beaucoup à toi !

[Rebeccathéter]

en plus d'après le cours, la GFP est utilisée comme une étiquette : elle est fusionnée à la protéine recombinante d'où un unique promoteur comme l'a dit @Flo2001 et un unique ATG et codon STOP -> on aura un unique ARNm

jsp si elle a d'autres rôles