sélections des cellules avec plasmides intégrés

[microtubulou]

salut! j'ai une question assez spécifique, si par exemple on transforme des cellules avec un plasmide qui "porte" un gène codant pour la résistance à l'ampicilline + un promoteur eucaryote, on pourra sélectionner les cellules transformées avec cet antibiotique ? 

mercii  

[Marinaddt]

Coucou @lou3008, on sait que l'ampiciline est un antibiotique permettant de sélectionner les cellules transformées (cellules prok) car ton plasmide est devenu résistant à cet antibiotique. Dis toi que l'ampicilline contient toujours un promoteur procaryote donc permet uniquement de sélectionner les bactéries transformées. Pour sélectionner les cellules transfectée (cellules euk) on utilisera la néomycine le plus souvent! il faut retenir ces deux antibiotiques qui tombent souvent. 

 

cependant rien n'empêche que dans ton plasmide il y est un promoteur eucaryote et un gène de résistant à l'ampicilline tout deux indépendant. Mais tu n'auras jamais comme promoteur pour ampicilline un eucaryote 

 

N'hésite pas si ce n'est pas clair! 

 

Edited January 26, 2021 by Marinaddt

[microtubulou]

Oui je vois, mais du coup il n'y a pas de rapport entre le fait que la cellule (procaryote du coup) soit devenue par transformation résistante à l'ampicilline, et le choix d'un antibio pour la sélectionner ? c'est ça que je ne comprends pas: comment savoir par quel moyen sélectionner les cellules transformées 

merci pour ta réponse!! 

[microtubulou]

Parce que en fait ce que j'avais cru comprendre, c'est que quand une cellule (proca ou euca) transformée exprime un gène de résistance à un antibio, on ne peut pas utiliser cet antibio pour la sélectionner (étant donné qu'elle y est résistante), j'avais pas compris qu'il y avait des histoires de spécificité ampicilline-proca et néomycine-euca par exemple

[Provencal_le_gaulois]

il y a 30 minutes, lou3008 a dit :

Parce que en fait ce que j'avais cru comprendre, c'est que quand une cellule (proca ou euca) transformée exprime un gène de résistance à un antibio, on ne peut pas utiliser cet antibio pour la sélectionner (étant donné qu'elle y est résistante), j'avais pas compris qu'il y avait des histoires de spécificité ampicilline-proca et néomycine-euca par exemple

En fait quand une bactérie a bien été transformée, elle va exprimer ce gène de résistance, donc par opposition les bactéries qui ont pas réussi la transformation ne vont pas l'exprimer. Ton but à ce moment-là comme tu le dit c'est de sélectionner celles qui sont transformées. Donc quand tu vas mettre l'antibiotique qui convient (celui pour lequel les bactéries intéressantes sont résistantes), tu vas tuer les bactéries non transformées et il ne te restera que les transformées et tu pourra les utiliser !

Est-ce que je réponds à ta question ?

et @Marinaddtest-ce que je tombe juste ? juste pour vérification que je dis pas de bêtises

 

Bonne journée !

[microtubulou]

Ok c'est bon je crois merci!!! 

[Marinaddt]

Coucou @lou3008, @Provencal_le_gauloisa absolument raison c'est ça qu'il faut que tu retiennes. 

 

Cependant je veux juste te souligner (pour être sur que tu es bien compris) que tu ne peux pas TRANSFORMER une cellule eucaryote. Cette action ne concerne que les bactéries, donc les cellules procaryotes. En revanche les cellules eucaryotes peuvent être TRANSFECTÉES.  Le terme diffère mais ça reste le même principe.

Attentions aux pièges!! 

 

N'hésite pas si tu as d'autres questions!