lorinne Posted January 25, 2021 Posted January 25, 2021 hey hey *dans ce qcm https://ibb.co/BBH1pMD la E est comptée fausse mais on voit que le phi est bien supérieur au ph donc normalement elle devrait être chargée positivement, est-ce que c'est une erreur? *je en vois pas en quoi la présence d'ORI permet aux plasmides d'être utilisé comme vecteurs? *https://ibb.co/bLg10cm dans ce qcm je ne comprends pas bien pourquoi la C et la D sont vraies ? *je ne vois pas comment La sélection des bactéries ayant intégré correctement le vecteur d'expression se fait grâce à de l'ampicilline le plus souvent? *qu'est-ce qu'un site polylinker? *est-ce qu'un vecteur recombinant est toujours circulaires? *je ne comprends pas la différence entre une recombinaison homologue et non homologue ? svp merciiii Quote
Solution Provencal_le_gaulois Posted January 25, 2021 Solution Posted January 25, 2021 (edited) Heeey again @lorinne Il y a 1 heure, lorinne a dit : dans ce qcm https://ibb.co/BBH1pMD la E est comptée fausse mais on voit que le phi est bien supérieur au ph donc normalement elle devrait être chargée positivement, est-ce que c'est une erreur? Alors... après une longue réflexion, je jugerais ça comme une erreur effectivement... Il y a 1 heure, lorinne a dit : je en vois pas en quoi la présence d'ORI permet aux plasmides d'être utilisé comme vecteurs? Alors, parce que c'est grâce à ça que le plasmide va pouvoir exprimer la protéine qu'on à insérée dedans. Ori c'est l'origine de réplication en fait, donc si ça y était pas, le plasmide ne se répliquerait pas et ne pourrait donc pas exprimer notre protéine ^^ Il y a 1 heure, lorinne a dit : dans ce qcm je ne comprends pas bien pourquoi la C et la D sont vraies ? Alors ! pour la C ça va fonctionner comme avec l'ampicilline, les plasmides qui auront intégré le fragment vont donc exprimer le gène de résistance à la zéocine. Donc quand on va mettre de la zéocine dans le milieu, tous les plasmides qui ont pas intégré correctement notre fragment vont mourir et il ne nous restera que ceux qui nous intéressent. C'est une manière de sélectionner ce qu'on veut. Pour la D... on va reprendre depuis le début. Dans l'énoncé ils disent qu'ils ont coupé avec EcoR1 pour insérer notre fragment. On a donc affaire à une insertion non orientée, c'est à dire que le fragment peut s'insérer dans le bon sens (ATG au début) ou dans le mauvais sens (ATG à la fin). En plus de ça il faut remarquer que le fragment d'intérêt possède un site de restriction pour BamH1. Donc, quand on va digérer par BamH1, l'enzyme va couper là où elle peut. Pour déterminer grâce à ça si les fragemtns sont dans le bon sens ou non il faut regarder la taille des fragments qu'on obtient après la digestion. - si le fragment est dans le bon sens: On obtiendra ces 2 fragments -hypothèse 2: le fragment est dans le mauvais sens: Et là tu vois grossièrement que la taille des fragments que tu obtiendrais n'est pas la même que dans l'hypothèse 1. On pourrait faire des calculs de taille mais ce n'est pas nécessaire là. Il faut que tu te schématises la différence de tailles de fragments. Si tu faisais ça en vrai, ça te permettrait donc de déterminer si telle colonie a le vecteur bon sens ou mauvais sens. J'espère que j'ai été claire là dessus ^^' c'est vraiment pas compliqué à comprendre, il faut juste s'entraîner à visualiser, ne pas hésiter à faire des schémas colorés comme les miens. Il y a 1 heure, lorinne a dit : je ne vois pas comment La sélection des bactéries ayant intégré correctement le vecteur d'expression se fait grâce à de l'ampicilline le plus souvent? C'est la même chose que ce que je t'ai expliqué plus tôt avec la zéocine. L'ampicilline va permettre de sélectionner les bactéries qui auront correctement inséré notre protéine. Et pour ce qui est de l'ampicilline spécifiquement, y a pas de raison particulière, juste ils aiment bien faire avec ça. il y a peut-être une vraie raison mais ce n'est vraiment pas l'important ici. Edited January 25, 2021 by Provencal_le_gaulois Quote
NONOS Posted January 25, 2021 Posted January 25, 2021 Salut @lorinne ! Quand le pH est inférieur au pHi la protéine est bien chargée positivement. ORI est simplement l'origine de réplication du plasmide. Un polylinker est le lieu d'insertion de l'ADNc, c'est un site de clonage multiple. Un vecteur recombinant n'est pas obligatoirement circulaire tout le temps. On parle de recombinaison lors de cassure double brin. Lors de la recombinaison non homologue (NHEJ), on a dégradation des extrémités de la brèche grâce à des exonucléases actives au niveau de la brèche jusqu'à ce qui est rencontre avec des zones de micro-homologies entre les 2 brins. On a alors une ligation via des kinases aux extrémités de la brèche. Ce qu'il faut surtout retenir c'est que la recombinaison non homologue est une réparation NON fiable (souvent perte ou modification de séquence) et qu'elle est possible à toutes les phases. Lors de la recombinaison homologue, la chromatide soeur non endommagée sert de matrice pour la réparation. Elle se fait donc que en phase S et G2 contrairement à la non homologue. On a ensuite une intervention de l'ADN pol et d'une ligase. Il y a formation de la structure de Holliday (hétéroduplexe). Il faut savoir que c'est une réparation FIABLE avec enjambement chromosomique ou non. Le gène de résistance à l'ampicilline permet la sélection des bactéries ayant intégré le vecteur. lorinne and Provencal_le_gaulois 1 1 Quote
Aile Posted January 25, 2021 Posted January 25, 2021 Salut @lorinne juste pour compléter @NONOS Il y a 1 heure, lorinne a dit : qu'est-ce qu'un site polylinker? Alors un site polylinker est un site multiple de clonage où tu vas trouver des sites de restrictions où tu vas pouvoir donc digérer ton plasmide avec une ou deux de tes enzymes de restrictions(ex: BamHI, HindIII..) pour pouvoir insérer un ADNc notamment lors du clonage. Si tu veux plus d'explications sur le clonage et que ma réponse n'est pas assez claire hésite pas! Il y a 2 heures, lorinne a dit : est-ce qu'un vecteur recombinant est toujours circulaires? Alors le vecteur va servir à recevoir un fragment d'ADN que tu veux par exemple amplifier ou produire en grosse quantité. Les vecteurs peuvent être bactériens ou viraux ainsi que d'autres mais c'est pas à ton programme. Dans les vecteurs bactériens, tu as les plasmides, c'est souvent ce type de vecteur que tu vas retrouver et les plasmides comme tu as du le voir en génome au S1 sont circulaires. Mais comme je te disais, tu peux avoir plein d'autres types de vecteurs comme notamment des chromosomes qui ne sont pas circulaires, c'est pas à savoir mais c'est juste un exemple pour que tu comprennes! Il y a 2 heures, lorinne a dit : e ne comprends pas la différence entre une recombinaison homologue et non homologue Je te mets la diapo de cours de génome de Langin du S1, même si @NONOS l'a très bien expliqué! NONOS 1 Quote
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