les techniques

[lorinne]

hello

*comment la chromatographie d'exclusion va permettre de nous dire si notre proteine est un monomere ou un oligomere?

 

*pourquoi dans la technique du western blot, un transfertsur filtre est necessaire avant l'incubation avec des anticorps?

 

*dans ce qcm, je ne sais pas comment on peut savoir que la C est vraie car quand c'est une chromatographie d'affinité je ne pensais pas qu'on utilisé le ph (chromatographie hydrophobe?)?

https://ibb.co/bX9Cz7P

 

*est-ce que qqn pourrait m'expliquer cet item compté vrai ? :

On peut greffer une étiquette (His)6 a la protéine d'intérêt en plaçant la séquence nucléotidique correspondante à l'étiquette entre le promoteur et l'insert en ayant retiré l'ATG de l'insert et conserver celui de l'étiquette.

 

*dans ce qcm, je ne comprends pas pourquoi on dit au'il est anti-infectueux alors que dans le diagramme des cellules normales on a la meme baisse ?

https://ibb.co/CvzB24k

 

*est-ce que la turbidimétrie est uniquement utilisée pour regarder la formation des MT in vitro en ft de la DO relevée  sur la solution à différentes températures?

 

merciii

[Provencal_le_gaulois]

Salut @lorinne !

Alors je vais essayer de répondre à tes questions, certaines me demanderont peut-être un tout petit peu plus de temps mais je reviendrai vers toi !

 

1) en fait la chromatographie d'exclusion va te permettre de trier selon la taille. Don si tu connais la taille globale de ta protéine, en fonction des tailles qui sortent dans ton résultat, tu peux voir si la protéine est composée de plusieurs morceaux ou si c'est un seul et même "morceau" et donc un monomère. Je sais pas trop comment t'aider plus sans avoir d'exemple sous les yeux...

 

2) Il me semble que cette étape de transfert sur filtre va permettre de limiter les interactions non spécifiques entre la membrane et les anticorps (on veut pas que les interactions se fassent entre ces 2 là, on veut une interaction entre les protéines et les anticorps pour voir si justement les protéines sont là. Si les Ac interagissent avec la membrane, ça nous fausse les résultats)

 

3) En fait lors d'une chromatographie d'affinité, la fixation va se faire à un certain pH, donc pour pouvoir éluer, on va abaisser le pH ce qui va permettre d'annuler la fixation et donc de récupérer la protéine qui nous intéresse et qui s'était fixée plus tôt.

 

4)Pour que l'étiquette soit exprimée il faut effectivement qu'elle soit après le promoteur. Pour ce qui est de retirer l'ATG, j'imagine que si tu le laisses, tu prends le risque que la protéine soit exprimée sans l'étiquette...

 

5)A priori, certes on observe la même baisse mais c'est lié à la dose, donc c'est un peu normal on va dire. Cependant il est surtout intéressant de regarder la différence pour chaque dose entre les souris normales et TNF KO. Et on voit vraiment qu'entre les 2 souris y a une grosse différence. Donc quand les souris ont un TNF alpha fonctionnel, y a beaucoup moins de colonies qui se développent. C'est ça qui te montre que le TNF alpha est anti-infectieux. 

 

6) hihihi.... là pour le coup je vais revenir vers toi après étude de tout ça ^^' vraiment désolée !

 

N'hésites pas si je manque de clarté dans mes réponses...

 

 

 

[lorinne]

@Provencal_le_gauloismerci beaucoup pour tes explications!

[Provencal_le_gaulois]

je reviens pour la 6 ! @lorinne

Non la turbidimétrie peut-être utilisée pour le dosage de protéines spécifiques comme celles du sérum, du plasma ou du lcr....

Edited January 25, 2021 by Provencal_le_gaulois

[lorinne]

@Provencal_le_gauloismerci beaucoup encore pour toutes tes explications aussi bien détaillées!