Yayou Posted January 24, 2021 Posted January 24, 2021 Coucou, alors je comprends pas pourquoi on utilise le glutathion à la fois comme support pour la chromatographie et pour l'élution, j'avais compris que pour l'élution on utilisait soit un composé de plus forte affinité pour le ligand ou un composé de plus forte affinité pour la protéine, du coup je comprends pas trop pourquoi ici on prend le même composé et surtout comment ça marche ? https://zupimages.net/viewer.php?id=21/03/81rh.png Si quelqu'un pouvait m'expliquer, merci beaucouppp Quote
Solution NONOS Posted January 25, 2021 Solution Posted January 25, 2021 Salut @Yayou ! La chromatographie d'affinité sert à la purification de protéines. Elle est basée sur l'interaction spécifique entre une protéine et son ligand. Elle utilise une colonne d'affinité sur laquelle est fixée de manière covalente le ligand de la protéine à purifier. On utilise par exemple comme substrat le glutathion réduit (GSH) pour purifier l'enzyme GST (glutathion S transférase). Sur la colonne on trouve des billes de sépharose liées au GSH, et on va mettre sur cette colonne un extrait protéique contenant la protéine étiquetée GST avec une solution de faible force ionique. Il y a alors une interaction entre le GSH et la GST ainsi que fixation sur la colonne. Les protéines exclues (non retenues) sont celles qui n'ont pas d'affinité pour le GSH. Ensuite on rajoute du GSH en excès (ou on peut aussi ajouter un gradient croissant de force ionique). Il y a alors une compétition avec le GSH de la colonne et les protéines éluées seront les protéines étiquetées GST. Quote
Yayou Posted January 25, 2021 Author Posted January 25, 2021 d'accord mercii beaucoup je comprends mieux! Quote
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