taille plasmide (colle PASS)

[Loupiotte]

Bonjour, ou bonsoir plutôt ! ^^

(j'arrive pas à trouver le post des colles donc je pose ça ici...)

 

Alors voilà : j'ai du mal à comprendre l'item D, compté vrai "le plasmide recombinant coupé par les enzymes correctes [BamH1 et Xho1] fait 6780 pb"

 

Il faut prendre la taille de base : 6200Pb, ça ok, mais ensuite

 

1/Pourquoi on perd 50Pb au niveau du plasmide de départ ?

2/Pourquoi est-ce qu'ensuite on rajoute la différence entre les deux (1300-670???)

 

J'ai du mal à comprendre tous ces calculs, et surtout le pourquoi du comment...

Merci à toi qui m'éclairera vers la compréhension de ce vrai casse-tête ! :3

 

[etelteleur]

Heyy alors :

hachu

 

Tu veux faire un plasmide recombinant. Pour cela tu vas mettre le gène d'intérêt dans le plasmide.

On utilise les enzymes de restriction BamH1 et Xho1.

 

1. Les enzymes de restriction ouvre le plasmide vide (dessin de gauche). Or, il y avait 50 pb entre les deux sites ( hachuré en rouge sur le schéma). Cette partie entre mes deux sites est perdue. Donc on a -50 pb
2. Les enzymes de restriction coupe le gène aux sites BamH1 (670)  et Xho1 (1300). 1300-670 est le calcul du nombre de paires de bases que représente le fragment du gène coupé (la partie en orange du schéma). Tu n'introduits que la partie orange dans le plasmide. 
3. Le gène ( la partie en orange) est insérée dans le plasmide qu'on a ouvert.

Si ce n'est toujours pas clair n'hésite pas ;3 

 

[Loupiotte]

AAAAAHHH !!

D'accord, je viens de comprendre qu'il y a à chaque fois deux enzymes avec le même nom : celle qui coupe le plasmide et celle qui coupe la partie du génome d'intérêt, ici orange.... (C'est le temps que ça monte au cerveau entre le cours et la compréhension, et surtout beaucoup grâce à tes supers schémas )

 

Merci beaucoup, et bonne soirée