UE11 - QCM5 p.132 - calculer la taille d'un vecteur recombinant

may_2dieux · January 16, 2021

Bonjour,

voici l'ennoncé sur le quel je bloque :

Des chercheurs ont découvert une protéine, la limousine, codée par le gène dnsLMSN, qui semble à l’origine d’un processus d’enlèvement de sa tours corporels. Ces chercheurs souhaitent exprimer cette protéine chez la souris pourvoir si la chute des poils est accélérée. Pour cela, ils fabriquent par génie génétique une cassette d’expression(ci-dessous) avec le gène d’intérêt dnsLMSN et le gène codant pour la GFP, qu’ils veulent introduire dans le plasmide plNKD(ci-dessous). Ils utilisent plusieurs enzymes de restriction (Zzz,Nnn,etc,surleschéma ci-dessous).

QCM 5 ─ Parmi les propositions suivantes, quelle(s) est(sont) la(les) réponse(s) vraie(s):

A.Si la cassette d’expressionet le plasmides ont digérés par Nnn et Yyy, l’insertion est dite « orientée ».

B.Si la cassette d’expression et le plasmide sont digérés par Nnn et Kkk, le vecteur re combinant possédera plusieurs cadres de lecture pour le gène dnsLMSN.

C.Des fibroblastes de souris sont transfectés avec des vecteurs recombinants. Si ces cellules expriment la GFP, la présence du gène dnsLMSN dans leur génome est certain.

D. Ces mêmes fibroblastes expriment obligatoirement la Limousine.

E. Le vecteur recombinant transfecté à ces mêmes fibroblastes avait une taille de 7,4 kb.

Je n'arrive pas a calculer la taille d'un vecteur recombinant :

il est noté que le vecteur fait 7,4 kb

je trouve 730b quand je calcule la taille de la cassette d'insertion.

est ce que la cassette d'insertion est égale au vecteur recombinant ou est ce que le vecteur recombinant c'est le plasmide avec la cassette insérée ? si c'est la cassette avec le plasmide, la cassette s'insère ou exactement ?

Merci de votre réponse

j'espère avoir été assez claire pour que vous puissiez m'aider

Edited January 16, 2021 by may_2dieux

Pikachumab · January 16, 2021

Saut salut,

Bon c'est vrai qu'il est pas facile celui là (j'ai galéré pour comprendre au départ mais ce qu'il faut que tu commences à faire c'est calculé le nombre de paires de bases entre Yyy et Nnn, or tu sais que le plasmide fait 8kpb donc à cela tu enlèves : 8000 -300-1000-3000-100-2000-600 et tu trouves donc 1000 paires de bases

Il ne te reste plus qu'à inclure le vecteur là où il peut se placer lorsque tu le coupes avec les endonucléases donc avec Nnn (pour garder le promoteur) et Kkk (pour avoir la queue polyA).

En résumé ton plasmide fera 1000 (distance Yyy-Nnn) + (300+400) (longueur plasmide)+( 3000+100+2000+600 ) --> longueur vecteur et tu arrives à 7400 pb donc 7,4kpb.

Je sais pas si c'est très clair mais n'hésites pas !!